肺泡Ⅱ型上皮细胞A549对TNF-α和LPS的刺激效果研究 |
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引用本文: | 黄建华,李理,邱娴,张安兵,黄文杰.肺泡Ⅱ型上皮细胞A549对TNF-α和LPS的刺激效果研究[J].免疫学杂志,2013(3):211-215. |
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作者姓名: | 黄建华 李理 邱娴 张安兵 黄文杰 |
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作者单位: | 南方医科大学研究生学院;广州军区广州总医院呼吸内科 |
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基金项目: | 国家自然科学基金面上项目(81070003);国家自然科学基金青年基金(81200002);广东省科技计划项目(2011B031800170);广东省科技计划项目(20120318040) |
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摘 要: | 目的研究肺泡Ⅱ型上皮细胞A549对TNF-α和脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)刺激的反应效果,探讨急性肺损伤体外细胞模型最佳造模方法。方法体外培养的A549细胞分为正常对照组(normal control,NC组),10 ng/ml TNF-α刺激2 h组,10 ng/ml和100 ng/ml LPS分别刺激2、4、8、16 h组。Western blotting检测胞浆IκB-α含量和IκB-α、NF-κB p65磷酸化水平,qRT-PCR检测细胞TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA转录水平,ELISA检测细胞培养上清IL-1β和IL-6质量浓度。结果 TNF-α刺激导致A549细胞大量凋亡或死亡,而LPS刺激对A549细胞生长形态无明显影响,且与LPS的刺激质量浓度和时间无关。TNF-α刺激可明显增加A549细胞内IκB-α和NF-κB p65磷酸化水平(P<0.05),而LPS刺激对A549细胞内IκB-α和NF-κB p65磷酸化水平无明显影响(P>0.05),且与LPS的刺激质量浓度和时间无关(P>0.05)。TNF-α刺激可显著增加A549细胞内TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA转录水平和培养上清中IL-1β、IL-6质量浓度(P<0.05),而LPS刺激对上述炎症因子的合成和分泌并无显著影响(P>0.05),且与LPS的刺激质量浓度和时间无关(P>0.05)。结论 TNF-α可以有效刺激A549产生过度炎症反应,而LPS不能刺激A549细胞产生炎症损伤,因此建立急性肺损伤体外细胞模型时可以考虑用TNF-α代替LPS刺激。
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关 键 词: | 急性肺损伤 A549细胞 TNF-α 脂多糖 |
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