| 摘 要： | 目的观察不同剂量肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)在构建大鼠骨性关节炎(osteoarthritis,OA)模型中对内质网应激的影响,初步探讨大鼠骨性关节炎病理过程中内质网应激的作用。方法将20只SPF级SD雄性大鼠随机分为健康对照组、TNF-α1ng/m L干预组、TNF-α5ng/m L干预组和TNF-α10ng/m L干预组,分别给予不同剂量TNF-α处理,4周后取材,培养提取的各组原代软骨细胞,采用MTT法检测不同剂量TNF-α对软骨细胞活力的影响;ELISA法检测内皮细胞粘附分子-1(endothelial cell adhesion molecule-1,s ICAM-1)含量变化,TUNEL法检测各组软骨细胞凋亡率,蛋白印迹法(Western blot)检测炎症因子MMP9、ICAM1的表达以及内质网应激指标IRE1、p-IRE1、GRP78的水平变化。结果 MTT法检测提示加入不同剂量的TNF-α后软骨细胞活力未见明显改变;TUNEL法检测结果提示,与对照组相比,TNF-α干预组软骨细胞凋亡率较高(P0.01),并呈浓度依赖性促进细胞凋亡;Western blot结果表明,与对照组相比,软骨细胞的p-IRE1、IRE1、GRP78、MMP9及ICAM1的表达水平呈TNF-α浓度依赖性升高(P0.01)。结论在TNF-α构建大鼠骨性关节炎模型中,炎症因子与内质网应激指标均发生显著改变,内质网应激可能在大鼠骨性关节炎的发生发展过程中发挥重要影响,且当TNF-α浓度为10 ng/m L时,其对炎性因子及内质网指标的作用效果最为显著。
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