三种纯化方法体外培养人胚嗅球嗅鞘细胞的比较

目的:嗅鞘细胞纯化培养方法有免疫亲和吸附法、免疫磁珠法、化学药物法、差速贴壁法、无血清饥饿法等,但均存在缺陷.比较3种纯化方法原代培养人胚嗅球嗅鞘细胞的纯度,寻求简单实用的高纯度人胚嗅球嗅鞘细胞的体外培养方法.方法:实验于2007-08/12在西安交通大学口腔医院医学实验中心进行.选用流产胚胎标本24份,胎龄4～6月,由西安交通大学第二医院和陕西省妇幼保健院产科提供.实验经产妇及家属同意,并经医院伦理委员会的批准.实验方法:取胚胎嗅球分离培养嗅鞘细胞,制成单细胞悬液.将单细胞悬液加入未包被的培养瓶中培养,然后再次将细胞悬液加入未包被的培养瓶中,具体差速时间根据观察决定.最后将差速贴壁后含未贴壁细胞的细胞悬液加入多聚赖氨酸包被的培养瓶或培养板中,用3种方法纯化培养:阿糖胞苷法、无血清饥饿法和间断神经营养因子3法纯化培养人胚嗅球嗅鞘细胞.比较3种纯化方法下嗅鞘细胞生长变化及纯度.结果:①培养早期嗅鞘细胞呈圆形, 随着培养过程进行细胞逐渐伸出细长突起呈双极、三极和多极细胞,胞核位于细胞中央. 成熟的嗅鞘细胞大多呈双极、三极细胞与许旺细胞相似,细胞折光性好,胞核呈圆形位于细胞中央,"煎蛋样" 细胞少见.②差速贴壁法培养3～6 d时纯度为88%,以后成纤维细胞增殖嗅鞘细胞纯度迅速下降.阿糖胞苷法阿糖胞苷作用后细胞大量死亡,免疫染色几乎未见阳性反应细胞存在.无血清饥饿法培养3～6 d时嗅鞘细胞纯度为90%,但细胞状态差.间断神经营养因子3法培养3～9 d时嗅鞘细胞纯度为95%,且细胞状态良好.结论:差速贴壁结合间断间断神经营养因子3法比结合阿糖胞苷法、无血清饥饿法获得的嗅鞘细胞纯度高,且细胞状态良好.

In vitro culture of human fetal olfactory bulb olfactory ensheathing cells by three purification methods