| 乙型肝炎病毒基因组中前-X-编码基因启动子序列的确定及转录活性的鉴定 |
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| 引用本文： | 杨倩,董菁,成军,刘妍,洪源,王建军,王琳,张树林. 乙型肝炎病毒基因组中前-X-编码基因启动子序列的确定及转录活性的鉴定[J]. 解放军医学杂志, 2003, 28(9): 763-765 |
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| 作者姓名： | 杨倩 董菁 成军 刘妍 洪源 王建军 王琳 张树林 |
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| 作者单位： | 100039,北京,解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心;100039,北京,解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心;100039,北京,解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心;100039,北京,解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心;100039,北京,解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心;100039,北京,解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心;100039,北京,解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心;100039,北京,解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金 (编号C39970 674,C0 30 1 1 4 0 2 ,C30 0 70 689,C3990 0 1 30 )，军队“十五”科技攻关青年基金 (编号 0 1Q1 38)，军队“十五”科技攻关面上项目 (编号 0 1MB1 35)，军队留学归国人员启动基金 (编号 98H0 38)资助课题 |
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| 摘 要： | 利用长距离精确聚合酶链反应 (LA PCR)扩增慢性乙型肝炎患者血清来源的 5个全长的HBV基因组DNA ,在分析不同克隆之间的序列变异程度时 ,发现所获得的 5个克隆在X区之前可能还存在一个开放读码框架 (ORF) ,长度 16 8bp ,编码 5 6个氨基酸残基(aa) ,并将其暂时命名为前 X(pre X)。为了解前 X编码区上游DNA序列是否具有启动子活性 ,选取翻译起始密码子ATG上游 2 2 5bp的基因片段 ,将其克隆至报告基因表达载体pCAT3中 ,构建pCAT3 前 X promoter表达载体 ,以该质粒转染HepG2细胞 ,用ELISA法检测报告基因编码产物氯霉素乙酰转移酶 (CAT)的表达活性。结果发现 ,质粒 pCAT3 前 X promoter能够指导CAT的表达 ,吸光度 (A值 )是pCAT3的 3 5倍 ,提示pCAT3 前 X promoter中插入的DNA序列具有启动子活性 ,说明这一段基因序列中存在新的启动子区 ,为研究、界定前 X的ORF的存在提供了直接的依据。
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| 关 键 词： | 肝炎病毒 乙型 前-X编码基因 启动子 |
| 修稿时间： | 2003-04-08 |
IDENTIFICATION OF PRE-X PROMOTER SEQUENCE IN HEPATITIS B VIRUS GENOME AND APPRAISAL OF ITS TRANSCRIPTION ACTIVITY |
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| Yang Qian,Dong Jing,Cheng Jun et al. Gene Therapy Research Center. IDENTIFICATION OF PRE-X PROMOTER SEQUENCE IN HEPATITIS B VIRUS GENOME AND APPRAISAL OF ITS TRANSCRIPTION ACTIVITY[J]. Medical Journal of Chinese People's Liberation Army, 2003, 28(9): 763-765 |
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| Authors: | Yang Qian Dong Jing Cheng Jun et al. Gene Therapy Research Center |
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| Affiliation: | Yang Qian,Dong Jing,Cheng Jun et al. Gene Therapy Research Center,Institute of Infectious Diseases,302 Hospital of PLA,Beijing 100039,China |
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| Abstract: | It was found that pre-X region was present in five clones of hepatitis B virus (HBV) genome from 2 patients with chronic HBV infection. The open reading frame (ORF) consisted of 168 base pair (bp), and could be transslated with the X gene in frame. To investigate the activity of pre-X gene promoter, promoter DNA sequence was amplified from HBV-DNA by polymerase chain reaction (PCR), The amplified product was cloned into pCAT3 vector, The HepG2 cells were transfected by pCAT3-Pre-X-p. The CAT activity was detected by an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) kit. It was found that pCAT3-Pre-X-p had higher activity of CAT, which was 3.5 fold over that of pCAT3-promoter. This result implicated that pCAT3-Pre-X-p possessed promoter activity. |
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| Keywords: | hepatitis B virus pre-X region promoter |
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