| POAG致病基因MYOC突变型载体的构建及在COS-7细胞中的表达 |
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| 引用本文： | 王建文,胡琦,吴琼,刘宏宇.POAG致病基因MYOC突变型载体的构建及在COS-7细胞中的表达[J].第四军医大学学报,2008,29(15):1356-1359. |
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| 作者姓名： | 王建文 胡琦 吴琼 刘宏宇 |
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| 作者单位： | 哈尔滨医科大学附属第一医院眼科,黑龙江哈尔滨150001 |
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| 基金项目： | 黑龙江省杰出青年科学基金，哈尔滨医科大学附属第一医院科研基金 |
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| 摘 要： | 目的:构建Pro370Leu突变型Myocilin(MYOC)基因真核表达质粒,并在COS-7细胞中表达以探讨突变蛋白表达特点.方法:以pGEM-T-MYOC质粒中MYOC为模板,用PCR介导的定点突变技术,得到Pro370Leu突变型MYOC基因(mutant MYOC,mMYOC),并定向亚克隆到真核表达质粒pDsRed2-N1上,得到pDsRed2-N1-mMYOC重组表达质粒,再用限制性内切酶消化和DNA测序鉴定,最后用脂质体包埋转染法转染COS-7细胞,进行荧光显微镜观察.采用WestemBlot分析蛋白分泌情况并检测突变蛋白对细胞凋亡的影响.结果:经酶切和DNA序列测定,第370密码子CCG转变为CTG,荧光显微镜观察显示mMYOC蛋白只定位在细胞质中,经Western Blot分析表明mMYOC蛋白只存在细胞裂解液中,经流式细胞仪检测突变型转染组凋亡细胞百分比较高为6.63%.结论:Pro370Leu突变型MYOC基因真核表达质粒构建成功,Pro370Leu突变型MYOC基因表达的蛋白呈分泌障碍状态,并具有促进细胞凋亡的趋势.
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| 关 键 词： | MYOC基因 定点突变 凋亡 青光眼 开角型 |
Construction of expression vector containing POAG pathologic mutant MYOC and its expression in COS-7 cells |
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| WANG Jian-Wen,HU Qi,WU Qiong,LIU Hong-Yu.Construction of expression vector containing POAG pathologic mutant MYOC and its expression in COS-7 cells[J].Journal of the Fourth Military Medical University,2008,29(15):1356-1359. |
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| Authors: | WANG Jian-Wen HU Qi WU Qiong LIU Hong-Yu |
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