阻断肝再生增强因子表达对HepG2细胞转化生长因子-α及表皮生长因子受体表达的影响

目的用RNA干扰技术阻断人肝再生增强因子（human augmenter of liver regeneration，hALR）表达，观察人肝癌细胞HepG2中转化生长因子-α（transforming growth faetor-α，TGF-α）及表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）的表达是否受影响，以阐明hALR在促进肝癌细胞生长的相关细胞因子网络中的作用。方法将构建好的人肝再生增强因子siRNA表达质粒pSIALR-A及其阴性对照质粒pSIALR-B分别转染至HepG2细胞，荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达，计算转染效率。免疫细胞化学法检测转染细胞中hALR表达，确定抑制效果。根据转染质粒的不同，将HepG2细胞分为3组：转染组（转染pSIALR-A）、阴性对照组（转染pSIALR-B）和空白组（未转染重组质粒）。放射免疫法检测阻断肝再生增强因子后各组细胞培养上清中TGF-α水平，Western blot法检测阻断肝再生增强因子后各组细胞EGFR蛋白的表达。结果转染组、空白组和阴性对照组TGF-α分别为（5.27±0.86）pg／ml、（7.92±2.65）pg／ml和（6.50±1.28）pg／ml，转染组与空白组、阴性对照组比较差异有统计学意义（P％0.05）；EGFR相对表达量分别为0.946±0.136、1.115±0.606和1.131±0.509，转染组与空白组、阴性对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论在促进肝癌细胞生长的细胞因子网络中，肝再生增强因子除了可以直接刺激肝癌细胞增殖外还可通过上调TGF-α及EGFR的表达水平参与肝癌的发生、发展。