华支睾吸虫RNA聚合酶Ⅱ延长因子的分子生物学及免疫学定位研究 |
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引用本文: | 张咏莉,;吴德,;詹苗,;胡旭初,;徐劲,;吴忠道,;余新炳.华支睾吸虫RNA聚合酶Ⅱ延长因子的分子生物学及免疫学定位研究[J].中国寄生虫病防治杂志,2009(5):359-363. |
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作者姓名: | 张咏莉 ;吴德 ;詹苗 ;胡旭初 ;徐劲 ;吴忠道 ;余新炳 |
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作者单位: | [1]广东药学院基础学院生物教研室,广东广州,510006; [2]广东省疾病预防控制中心,广东广州510300; [3]中山大学中山医学院病原生物学部,广东广州510089 |
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基金项目: | Supported by the national high technology research and development program of China (863 Program, No. 2006AA02Z422) and a grant from the key science and technique program of Guangdong Province (No. 2004A30801004) |
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摘 要: | 目的由华支睾吸虫成虫cDNA文库中筛选重要新基因并进行功能基因研究。方法生物信息学、基因克隆表达技术、免疫识别、S-P免疫组化等方法。结果由华支睾吸虫成虫cDNA文库成功分离到了csRPEF(RNA聚合酶Ⅱ延长因子)基因。通过BLASTX程序同源性比对,显示CsRPEF基因与小鼠和人类的RPEF基因同源性为82%。成功构建了CsRPEF原核表达载体,并在大肠埃希菌中进行了大规模诱导表达,所表达的GST融合蛋白经蛋白酶原切割后获得CsRPEF重组蛋白。凝胶扫描分析和Bradford法显示,CsRPEF重组蛋白的纯度和浓度分别为85%和(0.73±0.02)mg/ml。将CsRPEF重组蛋白接种至BALB/c小鼠进行免疫实验。间接ELISA法显示免疫小鼠抗体滴度达1:150。免疫识别结果显示此抗体可识别20ku CsRPEF重组蛋白和华支睾吸虫20ku虫源性蛋白。S-P免疫组化方法显示CsRPEF主要定位于华支睾吸虫成虫的表皮、皮下组织和虫卵三部位。CsRPEF新基因序列GenBank的登录号为EU232119。结论CsRPEF基因是防治华支睾吸虫病生物药物研发的重要靶点。
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关 键 词: | 华支睾吸虫 RNA聚合酶Ⅱ延长因子 免疫识别 免疫定位 |
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