| 弓形虫pVAX1-SAG2真核表达质粒的构建及其诱导的小鼠免疫应答 |
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| 引用本文： | 高世同,吴少庭,龙彩虹,张仁利,袁仕善,黄达娜.弓形虫pVAX1-SAG2真核表达质粒的构建及其诱导的小鼠免疫应答[J].中国人兽共患病杂志,2004,20(8):658-661. |
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| 作者姓名： | 高世同 吴少庭 龙彩虹 张仁利 袁仕善 黄达娜 |
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| 作者单位： | 深圳市疾病预防控制中心 深圳518200
(高世同，吴少庭，龙彩虹，张仁利，袁仕善)，深圳市疾病预防控制中心 深圳518200(黄达娜) |
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| 摘 要： | 目的 构建弓形虫主要速殖子表面抗原 2 (SAG2 )编码基因真核表达质粒pVAX1-SAG2 ,并接种小鼠 ,分析其所诱导的免疫应答。方法 以限制性内切酶EcoRⅠ与KpnⅠ双酶切从重组质粒 pGEM/SAG2中获得SAG2目的基因片段 ,约5 92个bp ,将其插入真核表达载体 pVAX1多克隆位点 ,构建重组质粒 pVAX1-SAG2 ,并转化大肠杆菌JM 10 9,阳性克隆以双酶切与PCR法鉴定。大量提取纯化重组质粒 pVAX1-SAG2 ,5 0 μg肌肉注射小鼠左后腿内侧肌肉 ,3周后加强免疫一次 ;RT-PCR检测SAG2在小鼠肌肉中的转录表达 ,流式细胞仪测定T细胞亚群 ,以速殖子虫体抗原作ELISA测定小鼠血清IgG抗体。结果 真核表达重组质粒 pVAX1-SAG2双酶切鉴定及PCR扩增结果与预期结果相符合。RT -PCR从注射部位肌肉组织总RNA中扩增出SAG2目的基因条带 ;重组质粒 pVAX1-SAG2免疫组CD 4 细胞数为 32 .35± 5 .38,显著高于空质粒pVAX1及生理盐水 (NS)二对照组 (P <0 .0 1) ,后二者CD 4 细胞数分别为 19.6 5± 4 .2 1与 17.84± 1.5 9;免疫组CD 8细胞数为 18.6 7± 2 .37,但与空质粒及NS对照组相比 ,差别不显著 (P >0 .0 5 )。ELISA测定结果显示 pVAX1/SAG2免疫组小鼠血清中出现抗弓形虫特异性IgG抗体。结论 构建成功SAG2真核表达重组质粒 pVAX1-SAG2 ,其能在
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| 关 键 词： | 弓形虫 速殖子主要表面抗原2(SAG2)基因 DNA接种 免疫应答 |
| 文章编号： | 1002-2694(2004)08-0658-04 |
| 修稿时间： | 2003年10月19 |
Construction of pVAX1-SAG2 Plasmid Encoding the SAG2 Protein of Toxoplasma Gondii and the Immnune Responses Induced in Mice |
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| GAO Shi-tong,WU Shao-ting,LONG Cai-hong,ZHANG Hong-Li,SI San,HUANG Da-na.Construction of pVAX1-SAG2 Plasmid Encoding the SAG2 Protein of Toxoplasma Gondii and the Immnune Responses Induced in Mice[J].Chinese Journal of Zoonoses,2004,20(8):658-661. |
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| Authors: | GAO Shi-tong WU Shao-ting LONG Cai-hong ZHANG Hong-Li SI San HUANG Da-na |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Toxoplasma gondii SAG2 encoding gene DNA vaccination Immune response |
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