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弓形虫pVAX1-SAG2真核表达质粒的构建及其诱导的小鼠免疫应答
引用本文:高世同,吴少庭,龙彩虹,张仁利,袁仕善,黄达娜.弓形虫pVAX1-SAG2真核表达质粒的构建及其诱导的小鼠免疫应答[J].中国人兽共患病杂志,2004,20(8):658-661.
作者姓名:高世同  吴少庭  龙彩虹  张仁利  袁仕善  黄达娜
作者单位:深圳市疾病预防控制中心 深圳518200 (高世同,吴少庭,龙彩虹,张仁利,袁仕善),深圳市疾病预防控制中心 深圳518200(黄达娜)
摘    要:目的 构建弓形虫主要速殖子表面抗原 2 (SAG2 )编码基因真核表达质粒pVAX1-SAG2 ,并接种小鼠 ,分析其所诱导的免疫应答。方法 以限制性内切酶EcoRⅠ与KpnⅠ双酶切从重组质粒 pGEM/SAG2中获得SAG2目的基因片段 ,约5 92个bp ,将其插入真核表达载体 pVAX1多克隆位点 ,构建重组质粒 pVAX1-SAG2 ,并转化大肠杆菌JM 10 9,阳性克隆以双酶切与PCR法鉴定。大量提取纯化重组质粒 pVAX1-SAG2 ,5 0 μg肌肉注射小鼠左后腿内侧肌肉 ,3周后加强免疫一次 ;RT-PCR检测SAG2在小鼠肌肉中的转录表达 ,流式细胞仪测定T细胞亚群 ,以速殖子虫体抗原作ELISA测定小鼠血清IgG抗体。结果 真核表达重组质粒 pVAX1-SAG2双酶切鉴定及PCR扩增结果与预期结果相符合。RT -PCR从注射部位肌肉组织总RNA中扩增出SAG2目的基因条带 ;重组质粒 pVAX1-SAG2免疫组CD 4 细胞数为 32 .35± 5 .38,显著高于空质粒pVAX1及生理盐水 (NS)二对照组 (P <0 .0 1) ,后二者CD 4 细胞数分别为 19.6 5± 4 .2 1与 17.84± 1.5 9;免疫组CD 8细胞数为 18.6 7± 2 .37,但与空质粒及NS对照组相比 ,差别不显著 (P >0 .0 5 )。ELISA测定结果显示 pVAX1/SAG2免疫组小鼠血清中出现抗弓形虫特异性IgG抗体。结论 构建成功SAG2真核表达重组质粒 pVAX1-SAG2 ,其能在

关 键 词:弓形虫  速殖子主要表面抗原2(SAG2)基因  DNA接种  免疫应答
文章编号:1002-2694(2004)08-0658-04
修稿时间:2003年10月19

Construction of pVAX1-SAG2 Plasmid Encoding the SAG2 Protein of Toxoplasma Gondii and the Immnune Responses Induced in Mice
GAO Shi-tong,WU Shao-ting,LONG Cai-hong,ZHANG Hong-Li,SI San,HUANG Da-na.Construction of pVAX1-SAG2 Plasmid Encoding the SAG2 Protein of Toxoplasma Gondii and the Immnune Responses Induced in Mice[J].Chinese Journal of Zoonoses,2004,20(8):658-661.
Authors:GAO Shi-tong  WU Shao-ting  LONG Cai-hong  ZHANG Hong-Li  SI San  HUANG Da-na
Abstract:
Keywords:Toxoplasma gondii  SAG2 encoding gene  DNA vaccination  Immune response  
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