弓形虫复合抗原基因P30-ROP2体外扩增、克隆及真核表达重组质粒的构建

目的 构建弓形虫RH株pcDNA3．1-P30-ROP2真核表达重组质粒，为进一步表达及DNA疫苗的研制作准备。方法 用PCR技术从弓形虫RH分离株的基因组DNA中扩增编码P30基因片段和棒状体蛋白(ROP2)的基因片段，重组人puC18克隆载体，然后将pUC18-P30-ROP2中的P30-ROP2外源基因片段经酶切、连接等反应，亚克隆入pcDNA3．1真核表达载体，再经含氨苄青霉素的LB培养基筛选、酶切及PCR鉴定。结果 从弓形虫RH株基因组中扩增m特异的P30、ROP2片段，克隆成功pUC18-P30-ROP2重组质粒；经亚克隆、筛选鉴定获得了pcDNA3．1-P30-ROP2重组表达质粒。结论 成功构建了弓形虫puC18P30-ROP2重组克隆质粒，亚克隆成功pcDNA3．1-P30-ROP2直核表达重组质粒，为下一步DNA疫苗的研究奠定了基础。