慢病毒介导的 KiSSI-微 RNA 对雌鼠促性腺激素释放激素及性激素水平的影响北大核心CSCD

目的：通过慢病毒载体介导的 RNA 干扰（RNAi）技术抑制雌鼠下丘脑 KiSSI 基因表达，分析KiSS1、促性腺激素释放激素（GnRH）mRNA 表达变化，血清性激素水平变化，探讨靶向沉默 KiSSI 基因对性发育的影响及可能的相关机制。方法21日龄 Sprague-Dawley 雌鼠90只，按照随机数字表分为3组：干扰病毒组、病毒对照组、9 g/ L 盐水对照组。干扰病毒组侧脑室注射携带 KiSSI-微 RNA（microRNA）的慢病毒，病毒对照组侧脑室注射无干扰作用的对照病毒，9 g/ L 盐水对照组侧脑室注射9 g/ L 盐水。在青春期前（30日龄）、青春发育早期（35日龄）、青春发育晚期（45日龄）时分别处死各组动物10只，留取下丘脑组织，实时定量（RT） PCR 检测下丘脑 KiSSI、GnRH mRNA 的表达，并同时留取血清采用化学发光法检测卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）、雌二醇（E2）水平。结果干扰病毒组的 KiSSI mRNA 与9 g/ L 盐水对照组及病毒对照组相比明显下调（30日龄0.106±0.018；35日龄0.218±0.025；45日龄0.215±0.033，P 均＝0.000）；干扰病毒组的 GnRH mRNA 表达在30日龄及35日龄显著下降（0.230±0.040、0.407±0.030，P 均＝0.000），45日龄时 GnRH mRNA与9 g/ L 盐水对照组和病毒对照组相比，差异无统计学意义（0.455±0.054，P ﹥0.05）。干扰病毒组 LH 水平（0.101±0.004）IU/ L]在35日龄低于9 g/ L 盐水对照组及病毒对照组（P ＝0.467）；干扰病毒组 FSH 水平（0.235±0.014）IU/ L]在35日龄低于9 g/ L 盐水对照组及病毒对照组（P ＝0.015）；干扰病毒组 E2水平在35日龄（171.750±11.050）IU/ L]及45日龄（192.310±13.100）IU/ L]时低于9 g/ L 盐水对照组及病毒对照组（P ＝0.000，0.010）。结论侧脑室注射携带 KiSSI-microRNA 的慢病毒载体，可下调 KiSSI mRNA 水平，进而影响 GnRH mRNA 及下游性激素的表达水平、推迟雌鼠的性发育进程。