糖尿病肾病肾阴虚证DNA消减文库的构建 |
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引用本文: | 赵晓山,罗仁,薛耀明,张曦倩,代方国,崔丽娟,傅婷婷.糖尿病肾病肾阴虚证DNA消减文库的构建[J].中医药学刊,2004,22(7):1204-1206. |
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作者姓名: | 赵晓山 罗仁 薛耀明 张曦倩 代方国 崔丽娟 傅婷婷 |
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作者单位: | 第一军医大学南方医院中医科,广东广州510515 |
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摘 要: | 在多年糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)肾虚证的研究中,结果发现血管紧张素Ⅰ转换酶(angiotensin Ⅰ—converting enzyme.ACE)基因多态性与肾阴虚证密切相关。这提示肾阴虚证存在其相关基因。目前克隆疾病的相关基因有多种方法,其中抑制性消减杂交(suppression subtractiv ehybridization。SSH)对研究复杂基因组的差异基因具有一定的优越性。目的:采用抑制性消减杂交技术(suppression subtractive hybridiration,SSH)构建汉族人糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)肾阴虚证DNA消减文库。方法:选择汉族DN且中医辨证为肾阴虚证的患者以及正常人作为其对照组,进行正向和反向消减杂交。用硅胶法抽提血白细胞DNA。用Rsa Ⅰ酶切基因组DNA成大小不等的片段,分别与两种不同的接头连接.进行两次消减杂交及两次抑制性PCR,将PCR产物与U载体连接,经蓝白斑筛选后,再用PCR方法插入片段筛选出阳性重组质粒,构建DN肾阴虚证DNA消减文库。结果:用SSH方法筛选出了DN肾阴虚证的差异DNA片段,得到586个白色克隆,再经PCR方法快速筛选出阳性重组质粒,从而成功地构建了DN肾阴虚证的DNA消减文库。结论:SSH技术能够快速有效地分离差异DNA片段以构建DN肾阴虚证DNA消减文库.为进一步筛选和克隆DN肾阴虚证相关基因奠定了基础。
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关 键 词: | 糖尿病肾病 肾阴虚证 抑制性消减杂交 基因组消减文库 |
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