| 摘 要： | 目的探索人肝癌细胞HepG2感染寨卡病毒(Zika virus, ZIKV)后的外泌体miRNA的表达差异, 对其靶基因进行预测、分析。方法以感染复数0.5的ZIKV(ZJ03株)感染HepG2, 以超速离心法提取、纯化感染2 d与未感染细胞的外泌体(Exo-ZIKV与Exo-NC)。以透射电镜观察外泌体形态, 纳米粒径分析检测外泌体粒径分布, Western blot检测外泌体标志蛋白质等方法鉴定。提取纯化外泌体小RNA, 进行miRNA测序与分析, 对部分差异表达miRNA采用实时定量PCR验证。生物信息方法分析差异miRNA靶基因。结果在透射电镜下呈杯托状双层膜小囊泡结构;粒径大小分布几乎一致但Exo-ZIKV浓度(5.24×108颗粒/ml )较Exo-NC(3.06×108 paritcle/ml)增多。Western blot检测出Hsp70、CD63和CD9蛋白表达, 测序分析显示共20个差异表达miRNA, 其中12个miRNA表达上调8个miRNA表达下调, 上调miRNA多与抗病毒通路相关, 差异表达miRNA对应的靶基因主要富集在嘧啶与嘌呤代谢等途径中。结论 ZI...
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