| 实时荧光定量PCR检测斑点热立克次体的方法建立 |
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| 引用本文： | 牛东升,杨晓,陈梅玲,王锡乐,温博海. 实时荧光定量PCR检测斑点热立克次体的方法建立[J]. 解放军医学杂志, 2008, 33(11): 1297-1299 |
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| 作者姓名： | 牛东升 杨晓 陈梅玲 王锡乐 温博海 |
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| 作者单位： | 军事医学科学院微生物流行病研究所,病原微生物生物安全国家重点实验室,北京,100071;军事医学科学院微生物流行病研究所,病原微生物生物安全国家重点实验室,北京,100071;军事医学科学院微生物流行病研究所,病原微生物生物安全国家重点实验室,北京,100071;军事医学科学院微生物流行病研究所,病原微生物生物安全国家重点实验室,北京,100071;军事医学科学院微生物流行病研究所,病原微生物生物安全国家重点实验室,北京,100071 |
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| 摘 要： | 目的 建立检测斑点热立克次体的群特异性实时荧光定量PCR方法.方法 根据斑点热立克次体外膜蛋白B(ompB)基因序列设计群特异性引物和探针,以克隆的斑点热立克次体ompB基因片段作为模板,在荧光定量PCR检测仪上建立实时荧光定量检测法.结果 该方法定量检测标准曲线的循环阈值(Ct)与模板拷贝数呈良好的线性关系,最小检出量小于10个拷贝.用该方法检测斑点热立克次体(立氏立克次体、西伯利亚立克次体、西伯利亚立克次体精河株、康氏立克次体、小蛛立克次体、澳大利亚立克次体、派氏立克次体、扇头蜱立克次体、非洲立克次体、阿斯特罕立克次体、斯洛伐克立克次体、日本立克次体、马赛立克次体、猫立克次体和黑龙江立克次体)DNA样本的结果均为阳性,但检测普氏立克次体、莫氏立克次体、恙虫病东方体、贝氏柯克斯体、查菲埃立克体、汉赛巴通体以及其他9种病原菌DNA样本的结果均为阴性.用荧光定量FCR检测立氏立克次体、黑龙江立克次体、西伯利亚立克次体精河株感染BALB/C小鼠脾脏组织DNA,均检出不同水平的阳性结果,结果与感染进程相关.结论 本研究建立的检测斑点热立克次体的实时荧光定量PCR具有较高的敏感性和群特异性,适合样本中各种斑点热立克次体的快速检测,可用于斑点热的实验室快速诊断和自然疫源地的流行病学研究.
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| 关 键 词： | 立克次体属 斑点热 聚合酶链反应 细菌外膜蛋白质类B |
Rapid detection of spotted fever grop rickettsiae with real-time quantitative PCR |
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