| 真核表达质粒pEGFP-N1-Bex2的构建及其在U251细胞中的表达 |
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| 引用本文： | 王永,孟庆明,周秀萍,石琼,冯守信,李忠喜,于如同.真核表达质粒pEGFP-N1-Bex2的构建及其在U251细胞中的表达[J].江苏医药,2013,39(16):1872-1876. |
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| 作者姓名： | 王永 孟庆明 周秀萍 石琼 冯守信 李忠喜 于如同 |
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| 作者单位： | 1. 徐州医学院附属医院立体定向科, 江苏省,221002
2. 徐州医学院附属医院神经外科, 江苏省,221002 |
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| 摘 要： | 目的 构建pEGFP-N1-Bex2真核表达质粒,并探索其在U251神经胶质瘤细胞中的表达.方法 以正常人脑组织总RNA为模板,采用RT-PCR法获得Bex2的cDNA,并与pEGFP-N1载体连接,构建pEGFP-N1-Bex2真核表达质粒.对pEGFP-N1-Bex2重组质粒的菌液行PCR鉴定、酶切鉴定和测序鉴定.在U251细胞中用脂质体转染法转染pEGFP-N1-Bex2真核表达载体过表达Bex2,分别于转染后12、24、48、72 h收集细胞,用Western blot检测Bex2基因的表达情况.结果 真核表达质粒pEGFP-N1-Bex2经PCR及双酶切鉴定,均可见387 bp的目的基因条带,并单倍正向克隆至质粒中.转染质粒pEGFP-N1-Bex2后荧光显微镜下观察U251细胞内有绿色荧光蛋白表达,Western blot检测见47 KD和26 KD分别有清晰的外源性Bex2-GFP融合蛋白和GFP蛋白的表达.pEGFP-N1-Bex2在转染U251细胞后12h即有表达,48 h达到高峰.结论 成功构建pEGFP-N1-Bex2真核表达质粒,瞬时转染后在U251细胞中顺利表达.
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| 关 键 词： | Bex2 神经胶质瘤 |
Construction of eukaryotic expression vector pEGFP-N1-Bex2 and its expression in U251 glioma cells |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Bex2 Glioma |
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