双反义腺病毒载体Ad—ODC—AdoMetDOas对食管癌细胞凋亡及抑制细胞生长影响的研究

目的：探讨双反义腺病毒载体（Ad—ODC—AdoMetDCas）对食管癌Eca109细胞凋亡作用及抑制细胞生长的影响。方法：应用M1Tr法测定不同MOI的腺病毒对肺癌Eca109细胞的基因转染效率，观察Ad—ODC—AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞生长增殖的影响；采用Western印迹和HPLC的方法分别检测腺病毒载体对食管癌Eca109细胞中ODC和AdoMetDC蛋白表达以及胞内多胺含量的抑制作用，采用流式细胞术检测腺病毒介导的鸟氨酸脱羧酶反义RNA（Ad—ODCas）和Ad—ODC—AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞周期分布的影响，同时应用原位末端标记（TUNEL）法观察Ad—ODC—AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞凋亡作用的影响。结果：MTT法实验表明，Ad—ODC—AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞生长增殖有显著抑制作用（P〈0．05）。以Ad—ODC—AdoMetDCas感染食管癌Eca109细胞，可明显抑制食管癌Eca109细胞中ODC和AdoMetDC基因表达（P〈0．05）。流式细胞术结果显示感染了Ad—ODC—AdoMetDCas的食管癌Eca109细胞周期阻滞在G。期。HPLC结果显示，食管癌Eca109细胞感染Ad—ODC—AdoMetDCas后，细胞内3种多胺含量均明显降低（P〈0．05）。TUNEL标记检测结果显示，Ad—ODC—AdoMet—DCas可明显引起食管癌Eca109细胞凋亡（P〈0．05）。结论：Ad—ODC—AdoMetDCas能显著抑制食管癌细胞生长，促进细胞凋亡，为探讨食管癌基因治疗的可行性提供实验依据。