COX-2启动子携带E1A的条件复制性腺病毒(Ad-COX-2-E1A)的构建及鉴定

目的 构建COX-2启动子携带E1A的条件复制性腺病毒,为今后利用Ad-COX-2-E1A治疗脑胶质瘤奠定基础.方法 ①pRsetB-E1A原核表达质粒的构建;②重组E1A蛋白的表达和纯化;③多克隆抗体的制备和抗体检测;④实验细胞COX-2表达水平的检测;⑤重组腺病毒质粒的构建及鉴定.结果 ①E1蛋白能够被有效表达,抗-E1A多克隆抗体滴度很高;②通过流式细胞仪和RT-PCR两种方法,在脑胶质瘤细胞A-172、LN-18中均检测到了较高水平的COX-2活性;③成功构建了重组腺病毒Ad-COX-2-E1A,并从基因和蛋白水平对其进行了鉴定.结论 Ad-COX-2-E1A被成功构建并具有良好的表达活性,可以作为今后胶质瘤基因治疗的良好载体.