| 人载脂蛋白C Ⅱ原核表达载体构建及蛋白表达方法 |
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| 作者姓名： | 赵莉莉 汪军梅 刘新宇 等 |
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| 作者单位： | [1]天津市心血管病研究所、天津市胸科医院,天津300051 [2]山西长治医学院 ,天津300051 [3]天津医科大学代谢病医院 ,天津300051 [4]天津医科大学生物化学教研室,天津300051 |
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| 摘 要： | 目的 构建人载脂蛋白CⅡ（ApoCⅡ）的原核表达载体,表达融合蛋白GST-hApoCⅡ.方法 采用限制性内切酶BamH Ⅰ、EcoR Ⅰ双酶切pUC18/hApoCⅡ获得ApoCⅡ成熟肽基因片段,并与相同酶切处理的表达载体pGEX-3X连接构建重组质粒.重组质粒经酶切鉴定、测序验证后转化感受态E.coli DH5α,IPTG诱导表达,优化表达条件,表达产物经SDS-PAGE电泳分析鉴定.选取最佳条件诱导表达,亲和层系法纯化融合蛋白,采用Western blot鉴定.结果 重组质粒经酶切和测序后证实目的基因已连接入表达载体,SDS-PAGE检测到35 kD的目的蛋白条带,优化和纯化后经Western blot证实蛋白质产物为融合蛋白GST-hApoCⅡ.结论 本方法成功表达融合蛋白GST-hApoCⅡ,此为ApoCⅡ结构及其作用机理研究及制备ApoCⅡ抗体等提供了便利条件.
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| 关 键 词： | 载脂蛋白CⅡ 脂蛋白脂肪酶 基因工程 高甘油三酯血症 融合蛋白 |
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