| 真核表达载体pEGFP-N1-hSyntenin的构建及其在人脑胶质瘤细胞CHG-5中的表达 |
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| 引用本文： | 钟东,唐文渊,冉建华,杨刚,晏怡. 真核表达载体pEGFP-N1-hSyntenin的构建及其在人脑胶质瘤细胞CHG-5中的表达[J]. 第三军医大学学报, 2010, 32(19) |
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| 作者姓名： | 钟东 唐文渊 冉建华 杨刚 晏怡 |
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| 作者单位： | 1. 重庆医科大学,附属第一医院神经外科,重庆,400016
2. 重庆医科大学,基础医学院解剖学教研室,重庆,400016 |
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| 摘 要： | 目的 构建pEGFP-N1-hSyntenin基因真核表达载体,并观察其在人脑胶质瘤细胞CHG-5中的表达.方法 采用RT-PCR技术从人脑肿瘤组织中扩增hSyntenin,并将PCR产物双酶切后定向克隆入pEGFP-N1的多克隆位点,构建pEGFP-N1-hSyntenin重组质粒.经过菌落PCR、双酶切及测序验证后,采用脂质体转染技术将pEGFP-N1-hSyntenin融合基因转染CHG-5细胞表达,G418筛选建立稳定表达hSyntenin的CHG-hS细胞系.采用荧光检测和免疫印迹技术分析hSyntenin在稳定转染的CHG-5细胞系中的表达.结果 菌落PCR鉴定出1个阳性克隆,阳性克隆经双酶切鉴定得到分别与载体和目的 片段大小一致的4.7 kb和897 bp的两条片段,测序证实目的 基因hSyntenin正确连接到pEGFP-N1的多克隆位点;pEGFP-N1-hSyntenin重组体稳定转染CHG-5细胞后,细胞荧光检测结果显示hSyntenin在CHG-5细胞质发出绿色荧光,免疫印迹检测可见32×103处的阳性条带.结论 成功构建pEGFP-N1-hSyntenin重组质粒,并在人脑胶质瘤细胞CHG-5中获得稳定表达.
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| 关 键 词： | 稳定转染 |
Construction of eukaryotic expression vector pEGFP-N1-hSyntenin and its expression in CHG-5 cells |
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| Zhong Dong,Tang Wenyuan,Ran Jianhua,Yang Gang,Yan Yi. Construction of eukaryotic expression vector pEGFP-N1-hSyntenin and its expression in CHG-5 cells[J]. Acta Academiae Medicinae Militaris Tertiae, 2010, 32(19) |
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| Authors: | Zhong Dong Tang Wenyuan Ran Jianhua Yang Gang Yan Yi |
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| Affiliation: | Zhong Dong1,Tang Wenyuan1,Ran Jianhua2,Yang Gang1,Yan Yi1(1 Department of Neurosurgery,First Affiliated Hospital,2 Department of Anatomy,College of Basic Medical Sciences,Chongqing Medical University,Chongqing,400016,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | pEGFP-N1-hSyntenin CHG-5 |
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