SARS-COV 5′UTR在基因转录中的启动子活性(英文)

目的了解SARS-COV不同毒株5’UTR RNA的构成特点和差异及其空间结构;研究该序列在真核细胞中的启动子活性。方法用软件DNASTAR-MEGALIGN和BLAST分析SARS-COV5’UTR序列同源性、RNADRAW3.0预测二级结构;构建5’-UTR CDNA序列驱动的荧光素酶基因表达质粒PGL3-5’-UTR,转染HEPG2细胞,检测萤火虫荧光素酶的表达;构建一套缺失突变质粒,使其分别3’端残留三个、两个、一个和零个(完全缺失)茎环,检测报告基因的表达;采用5’-RACE,查找转录起始位点;将PGL3-5’UTR转染A549、HEPG2、VERO E6、HELA和ECV304,检测报告基因的表达差异。结果 SARS-COV 5’UTR全长为264NT,18株有缺失突变均位于5’端。101个SAJRS-COV 5’UTR序列中,共发现5个点突变位置;SARS-COV 5’UTRRNA可形成稳定的二级结构。STEM-LOOP-Ⅱ含多个茎环结构,形成复杂的假结;PGL3-5’-UTR有明显的萤火虫荧光素酶表达;当4个茎环都具备时,荧光索酶相对活性是SV40启动子的约43%;失去第一个茎环后,是SV40启动子的约45%;而失去前两个后,则不表达荧光素酶;转录起始位点在SARS-COV 5’UTR的第56位核苷酸;在五种不同细胞中,表达强度由高到低依次是:A549、HEPG2、ECV304、HELA和VERO E6。结论①SARS-COV 5’UTR序列保守,二级结构可形成4个茎环结构域;②SARSC-OV 5’UTR有启动子活性;③在二级结构中,与启动子活性有关的结构域在前两个茎环;④SARS-COV 5’UTR在调控基因转录时,第56位核苷酸及其下游的TRS具有重要作用;⑤多种组织或器官都可为SARS-COV 5’UTR发挥启动子功能提供辅助因子,而以肺源性细胞最为适合。