| 摘 要： | 背景：瘦素是脂肪组织产生的一种激素，具有广泛的生理作用，也是近年能量代谢研究的热点之一，所用瘦素主要是大肠杆菌的表达产物，后者以不溶解的包含体形式存在，需要通过烦琐的复性过程才能获得具有生物学活性的人瘦素。目的：为获得天然溶解形式的人瘦素．探索其非亲和层析纯化条件，为进一步可能的产业化提供依据。设计：实验观察。单位：一所医学院的生化教研室分子生物学实验室。材料：选择强阴离子交换剂(Sepharose Q)和疏水介质(Phenyl Sepharose 6)在不同条件下进行层析的方法，以尽可能除去样品中的杂质。方法：将培养获得的上清液在pH7．5的条件下首先经过Q柱柱层析纯化，收集目的蛋白；随后在高盐[mol／L(NH4)2SO4]状态下通过疏水层析进一步纯化。主要观察指标：经凝胶扫描分析，纯化前的培养上清液人瘦素纯度为42．3％，Q柱柱层析纯化后纯度达到89．6％，疏水层析进一步纯化后纯度达到96．2％。结果：纯化产物在SDS-PAGE上呈现单一条带。经凝胶扫描分析，纯化前的培养上清液人瘦素纯度为42．3％，Q柱柱层析纯化后纯度达到89．6％，疏水层析进一步纯化后纯度达到96．2％。结论：通过强阳离子交换层析和疏水层析的合并应用，可将毕赤酵母表达系统表达的人瘦素进行有效纯化，纯度可达镍柱亲和层析的纯化结果，为进一步可能的产业化生产人瘦素提供了可靠依据和方法，为围绕瘦素的相关领域研究奠定了实验学基础。
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