人肝癌组织中γ-谷氨酰转移酶异常表达及其基因甲基化程度的研究

目的探讨γ谷氨酰转移酶（ＧＧＴ）基因在人类肝癌发生过程中的表达及改变机制。方法以病理组织学、生物化学和分子生物学方法，将自身配对的肝癌、癌旁组织和远癌组织中总ＲＮＡ纯化，对ＧＧＴ的表达与改变进行了分析；并设计两套引物，以逆转录巢式ＰＣＲ法扩增ＧＧＴ５′非编码区（ＮＣ）基因和限制性内切酶消化分析了不同肝癌组织中ＧＧＴ基因的甲基化程度。结果在病理组织学证实的２４例肝癌、癌旁和远癌组织中：①从肝癌灶至远癌的不同组织中，总ＲＮＡ浓度呈逐步升高趋势，三种不同组织间的差异均有显著性（Ｐ＜０．０５）；②癌组织中总ＧＧＴ比活性（Ｕ／ｇ）较癌周和远癌组织明显升高（Ｐ＜０．０５）；③以自行设计建立的逆转录巢式ＰＣＲ法，成功地扩增ＧＧＴ的５′ＮＣ基因片段，特异性强且区带清晰，ＰＣＲ产物经酶切分析证明，ＧＧＴ基因５′ＮＣＭ３位点（ＣＣＧＧ），其内位Ｃ在癌灶、癌周和远癌组织中的低甲基化频率分别为７０．８３％，５８．３３％和５４．１７％，非常明显地高于同组中已甲基化程度。结论肝癌组织中ＧＧＴ基因甲基化程度较低，且与肝癌ＧＧＴ的异常表达关系密切，对肝细胞癌变可能起促进作用。