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| 人ENO1(Enolase-α)基因的原核表达、蛋白纯化及多克隆抗体的制备 | |
| 引用本文： | 王玉凤,幺坤,关泉林,祝秉东.人ENO1(Enolase-α)基因的原核表达、蛋白纯化及多克隆抗体的制备[J].现代肿瘤医学,2014,22(11). |
| 作者姓名： | 王玉凤 幺坤 关泉林 祝秉东 |
| 作者单位： | 1. 兰州大学第一临床医学院,甘肃兰州,730000 2. 兰州大学第一医院肿瘤外科,甘肃兰州,730000 3. 兰州大学结核病研究中心,甘肃兰州,730000 |
| 基金项目： | 兰州大学第一医院院内基金项目 |
| 摘 要： | 目的:构建人ENO1(human Enolase-α)基因的原核表达质粒,诱导重组蛋白的表达,利用纯化后的蛋白制备具有活性的ENO1多克隆抗体.方法:用PCR方法从胃癌MKN45细胞全基因组中扩增出目的基因ENO1,将目的基因和原核表达载体pET30a(+)分别双酶切,回收酶切产物并用T4连接酶连接,获得重组质粒pET30a(+)-ENO1.将重组质粒转入大肠埃希菌菌株BL21,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,用Ni-NTA亲和层析柱纯化,利用纯化的ENO1活性蛋白作为抗原免疫家兔,制备抗血清多克隆抗体,并用Western blot检测其特异性.结果:目的基因与原核表达载体经双酶切鉴定所切下的片段大小与理论值相符,测序结果表明重组人ENO1基因序列与NCBI(NM_001428.3)公布序列一致.经SDS-PAGE分析,结果显示重组蛋白的分子量约在47kDa,条带单一,无杂带出现,主要以可溶性形式存在.Western blot证实多克隆抗体制备成功.结论:成功表达、纯化了ENO1融合蛋白,制备了具有高特异性的多克隆抗体,为进一步肿瘤疫苗的研制和肿瘤标志物快速诊断的研究奠定基础. |
| 关 键 词： | 烯醇化酶-α 原核表达 纯化 多克隆抗体 |
Pronucleus expression,purification and preparation of polyclonal antibody of Enolase gene |
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| Wang Yufeng,Yao Kun,Guan Quanlin,Zhu Bingdong.Pronucleus expression,purification and preparation of polyclonal antibody of Enolase gene[J].Journal of Modern Oncology,2014,22(11). | |
| Authors: | Wang Yufeng Yao Kun Guan Quanlin Zhu Bingdong |
| Abstract: | |
| Keywords: | Enolase-α pronueleus expression purification polyclonal antibodies |
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