| 人膜连蛋白A2基因重组慢病毒载体的构建及其在肝癌细胞株中的表达 |
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| 引用本文： | 杨东昌,母小新,刘巧玉,邓 蕾,陈 云,孙倍成.人膜连蛋白A2基因重组慢病毒载体的构建及其在肝癌细胞株中的表达[J].南京医科大学学报,2011(2):161-165. |
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| 作者姓名： | 杨东昌 母小新 刘巧玉 邓 蕾 陈 云 孙倍成 |
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| 作者单位： | 南京医科大学第一附属医院肝脏外科;南京医科大学微生物与免疫教研室; |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金青年基金(30901750); 南京医科大学科技发展基金重点项目(NMUZ009); 教育部“新世纪优秀人才支持计划”(NCET-09-0160); 江苏省卫生厅“科教兴卫工程”医学重点学科(RC2007057) |
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| 摘 要： | 目的:构建重组慢病毒载体pWPT-ANXA2-Flag,并检测其在小鼠肝癌细胞系Hepa 1-6的表达情况。方法:利用DNA重组技术将人膜连蛋白A2(annexin A2,ANXA2)基因克隆入慢病毒表达载体pWPT中,通过酶切、测序验证后,将重组慢病毒载体pWPT-ANXA2-Flag与包装质粒pCMV-dR8.91、pCMV-VSV-G共转染人胚肾上皮细胞株293T,包装重组慢病毒LV-ANXA2-Flag,并感染小鼠肝癌细胞株Hepa 1-6,用RT-PCR检测ANXA2 mRNA转录水平,Western blot法检测ANXA2-Flag蛋白的表达情况,应用流式细胞仪检测细胞周期的变化。结果:经酶切及测序结果证实,构建了重组慢病毒载体pWPT-ANXA2-Flag;RT-PCR及Western blot结果显示慢病毒感染Hepa 1-6细胞后,ANXA2基因能够在细胞内正确的转录、翻译并稳定表达ANXA2蛋白;经过LV-ANXA2-Flag感染后,Hepa 1-6细胞S期细胞比例明显高于对照细胞。结论:成功建立ANXA2基因慢病毒表达载体pWPT-ANXA2-Flag,包装的慢病毒能够成功感染小鼠肝癌...
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| 关 键 词： | 膜连蛋白A2 慢病毒载体 肝癌 |
| 收稿时间： | 7/5/2010 12:00:00 AM |
Construction of the recombinant lentiviral vector containing human ANXA2 gene and its expression in hepatocellular carcinoma cells |
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| YANG Dong-chang,MU Xiao-xin,LIU Qiao-yu,DENG Lei,CHEN Yun and SUN Bei-cheng.Construction of the recombinant lentiviral vector containing human ANXA2 gene and its expression in hepatocellular carcinoma cells[J].Acta Universitatis Medicinalis Nanjing,2011(2):161-165. |
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| Authors: | YANG Dong-chang MU Xiao-xin LIU Qiao-yu DENG Lei CHEN Yun and SUN Bei-cheng |
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| Institution: | YANG Dong-chang,MU Xiao-xin,LIU Qiao-yu,DENG Lei,CHEN Yun1*,SUN Bei-cheng*(Department of Liver Surgery,the First Affiliated Hospital of NJMU,Nanjing 210029,1Department of Microbiology and Immunology,NJMU,China) |
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| Abstract: | Objective: To construct the recombinant lentiviral vector containing human annexin A2(ANXA2) gene and measure the expression level of ANXA2 in hepatocellular cell line of Hepa 1-6.Methods:The ANXA2 fragment was amplified by PCR and subcloned into the lentiviral vector pWPT.The resultant lentivirus were confirmed by PCR,restriction enzyme digestion and DNA sequencing.Recombinant lentivirus(LV-ANXA2-Flag) were produced from 293T by transient calcium-phosphate co-transfection with pWPT-ANXA2-Flag,CMVR8.91and p... |
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| Keywords: | annexin A2 lentiviral vector hepatocellular carcinoma |
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