华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶的基因表达与在ELISA诊断上的应用研究 |
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作者姓名: | 裴福全 IsaoNagano ZhiliangWu 吴军 阮彩文 崔惠儿 YUZOTakahashi 方悦怡 |
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作者单位: | [1]广东省疾病预防控制中心,寄生虫病防治研究所,广东广州510300 [2]DepartmentofParasitology,GifuUniversitySchoolofMedicine,Gifu501-1194,Japan |
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摘 要: | 目的 探讨重组华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶在华支睾吸虫病血清学诊断上的应用价值。方法 以成虫cDNA为模板PCR扩增GenBank中一个华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶(No.AF093242,简称CysB)的部分基因片段,亚克隆到pTrcHis表达载体,转化入大肠埃希菌DH5α。表达出的重组蛋白经亲合层析纯化后用于ELISA检测华支睾吸虫及其他寄生虫感染血清,评价其诊断应用价值。结果 成功克隆与表达CysB基因片段,纯化后的重组蛋白用于华支睾吸虫病诊断的敏感性达96.0%(48/50),与其他寄生虫病的总交叉反应为3.8%(1/26),而对比实验中可溶性粗抗原(CAA)用于检测的敏感性为88.0%(44/50).与其他寄生虫感染血清无交叉反应。结论 重组华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶(CysB)用于ELISA诊断技术具有较高的敏感性及特异性,有希望成为可溶性粗抗原的替代之一。
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关 键 词: | 华支睾吸虫 重组半胱氨酸蛋白酶 基因表达 免疫学诊断 |
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