PI3K和Notch信号途径对寻常型银屑病患者外周血CD4+T细胞的增殖和活化发挥协同调控作用

 

目的 研究PI3K和Notch信号途径在寻常型银屑病患者外周静脉血CD4⁺ T细胞增殖、活化中的影响。方法 采集28例寻常型银屑病患者和28例健康对照外周静脉血，采用免疫磁珠法分选外周血CD4⁺ T细胞。将寻常型银屑病患者外周血CD4⁺ T细胞分为4组：空白对照组，10 μmol/L PI3K阻滞剂组（LY294002组），25 μmol/L Notch阻滞剂组（DAPT组），10 μmol/L LY294002+25 μmol/L DAPT组（LY294002+DAPT组）。均分别用植物血凝素（PHA）10 μg/mL和IL-2 1 000 U/mL刺激增殖6 h，采用FCM检测CD4⁺ T细胞内的CyclinA、Cyclin D1及P27^kipl细胞周期蛋白水平，逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测Cyclin A、Cyclin D1及P27^kipl mRNA水平，并对数据进行统计学处理。结果 CD4⁺ T细胞经免疫磁珠法分选后纯度为（90.00±3.90）％，CD4⁺ T细胞培养存活百分率达（92.50±4.60）％。寻常型银屑病患者外周血CD4⁺ T细胞Cyclin A、Cyclin D1水平分别为（27.60±3.80）％、（14.70±3.20）％,mRNA水平分别为0.56±0.14、1.37±0.39，与健康对照组（13.50±3.70）％、（7.80±2.00）％和（0.31±0.12）、（0.93±0.35）比较均明显升高，差异有统计学意义（P分别为0.002、0.037和0.008、0.043）。寻常型银屑病患者外周血CD4⁺ T细胞P27^kipl蛋白和mRNA分别为（23.50±3.60）％和（0.17±0.02），均低于健康对照组的（36.80±5.60）％和（0.33±0.05），差异有统计学意义（P分别为0.007、0.001）。与空白对照组CD4⁺ T细胞Cyclin D1蛋白和mRNA表达［分别为（12.30±3.50）％和（1.74±0..39）］比较，LY294002组、DAPT组、LY294002+DAPT组表达均下降，分别为（7.20±3.10）％、（8.20±2.50）％、（4.30±1.50）％和（1.11±0.29）、（1.26±0.28）、（0.63±0.20），差异均有统计学意义（均P<0.05）。与空白对照组CD4⁺ T细胞P27^kipl蛋白［（21.80±3.20）％］比较，LY294002组、DAPT组、LY294002+DAPT组蛋白水平均升高，分别为（30.90±5.10）％、（27.60±5.20）％、（43.90±3.00）％，差异均有统计学意义（P分别为0.005、0.006、0.001）；与空白对照组CD4⁺ T细胞P27^kipl mRNA（0.15±0.08）比较，LY294002组、DAPT组、LY294002+DAPT组水平均上升，分别为（0.37±0.07）、（0.62±0.09）、（0.99±0.21），差异均有统计学意义（P分别为0.018、0.002、0.003）。空白对照组、LY294002组、DAPT组、LY294002+DAPT组组间CD4⁺ T细胞Cyclin A蛋白和mRNA表达无显著性差异（均P>0.05）。结论 PI3K与Notch信号途径可协同增强CD4⁺ T细胞内正向调节蛋白Cyclin D1水平升高及负向调节蛋白P27^kipl水平下降，提示PI3K和Notch信号途径对寻常型银屑病患者外周血CD4⁺ T细胞的增殖、活化起着协同调控作用。

PI3K and Notch signaling pathway play a synergistic regulatory role in the proliferation and activation of CD4+ T cells in peripheral blood of patients with psoriasis vulgaris