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| pcDNA3.1/hTSHR_(1043～1354 bp)重组体的构建及在中国仓鼠卵巢细胞中的表达 | |
| 引用本文： | 朱云娟,赵紫琴,李兰英,陆凤先,姚智.pcDNA3.1/hTSHR_(1043～1354 bp)重组体的构建及在中国仓鼠卵巢细胞中的表达[J].中国药物与临床,2007,7(5):325-328. |
| 作者姓名： | 朱云娟 赵紫琴 李兰英 陆凤先 姚智 |
| 作者单位： | 1. 300070,天津医科大学免疫学教研室 2. 300070,天津医科大学病理生理学教研室 3. 300070,天津医科大学代谢病医院内分泌学研究所卫生部重点实验室 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金;天津市科技发展基金 |
| 摘 要： | 目的构建重组体pcDNA3.1/hTSHR1043～1354bp及在中国仓鼠卵巢细胞(CHO)表达hTSHR膜外区氨基酸314～418蛋白分子。方法提取人正常甲状腺组织总RNA,反转录后进行聚合酶链反应(PCR),将纯化的扩增产物hTSHR1043～1354bp与表达载体pcDNA3.1连接后转化TOP10E.coli感受态菌。经PCR、HindⅢ酶切和核苷酸序列测定方法鉴定插入序列和方向正确的重组质粒转染CHO细胞,并用Westernblot方法鉴定表达的蛋白。结果PCR扩增得到hTSHR膜外区C端312bp的基因片段hTSHR1043～1354bp。该片段与表达载体pcDNA3.1的连接后转化TOP10E.coli感受态菌。重组质粒经PCR、HindⅢ酶切和核苷酸序列测定方法鉴定证实hTSHR1043～1354bp片段插入序列和方向正确。重组质粒转染的CHO细胞裂解液经Westernblot可以检测出15900的蛋白条带,与预期的蛋白相对分子质量相符。结论成功构建了重组体pcDNA3.1/hTSHR1043～1354bp,其转染CHO细胞后表达159000的目的蛋白(hTSHR氨基酸314～418蛋白片段)。 |
| 关 键 词： | 受体 甲状腺激素 基因表达 甲状腺炎 自身免疫性 pcDNA3.1 |
| 修稿时间： | 2007-01-16 |
Construction of recombinant pcDNA3.1/hTSHR1043～1354 bp and its expression in CHO cells |
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| ZHU Yun-juan,ZHAO Zi-qin,LI Lan-ying,LU Feng-xian,Yao Zhi.Construction of recombinant pcDNA3.1/hTSHR1043～1354 bp and its expression in CHO cells[J].Chinese Remedies & Clinics,2007,7(5):325-328. | |
| Authors: | ZHU Yun-juan ZHAO Zi-qin LI Lan-ying LU Feng-xian Yao Zhi |
| Institution: | Department of Immunology, Tianjin Medical University, Tianjin 300070, China |
| Abstract: | |
| Keywords: | pcDNA3 1 |
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