基于ITS2序列鉴别中药材钩藤及其同属近缘混伪品 |
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引用本文: | 姚能,胡超逸,魏一丁,郑雅涵,胡志刚.基于ITS2序列鉴别中药材钩藤及其同属近缘混伪品[J].时珍国医国药,2019(2). |
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作者姓名: | 姚能 胡超逸 魏一丁 郑雅涵 胡志刚 |
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作者单位: | 湖北中医药大学药学院;湖北中医药大学詹亚华名医工作室 |
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摘 要: | 目的应用ITS2序列鉴定多基原药材钩藤及其同属近缘混伪品,确保临床用药准确、安全。方法收集钩藤药材基原物种实验材料16份,采用改良后的CTAB法提取总DNA,通过PCR扩增、测序、序列拼接和注释后获得各自的ITS2序列并进行相似性比对验证,结合NCBI下载的同属相关物种ITS2序列64条,基于MEGA 6.0进行序列分析,比较钩藤药材各基原物种的序列差异,计算种内及种间Kimura 2-Parameter(K2P)距离,以邻接(NJ)法构建系统发育树。综合应用相似性搜索法、最近距离法以及NJ树对钩藤药材及同属混伪品进行鉴定分析。结果钩藤药材各基原物种ITS2序列长度为220-221 bp,各基原物种种内最大K2P距离均小于与同属其他物种的种间最小K2P距离,系统NJ树不仅能准确将钩藤药材基原物种区分开,更能将该属在我国分布的绝大多数物种区分开。结论该研究建立了基于ITS2序列的多基原药材钩藤DNA条形码鉴定技术方法,能够成功用于钩藤药材真伪鉴定,为临床准确用药提供依据。
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