RhoA/Rho激酶信号通路在TGF-β1诱导的人皮肤成纤维细胞表型转化中的作用

目的 观察TGF-1对人皮肤成纤维细胞表型转化的作用是否受到RhoA/Rho激酶信号通路的影响，以探究该通路是否参与了人皮肤成纤维细胞的表型转化。方法 原代培养人皮肤成纤维细胞，将第4代细胞用TGF-β1( 10 ng/ml)刺激后，分不同作用时间(0、3、6、24h)提取细胞内总蛋白。BCA法测定总蛋白浓度，Western -blot检测α-SMA的表达水平；并用相同的方法检测不同浓度TGF-β1(0、2、10、50 ng/ml)刺激人皮肤成纤维细胞后，α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin，α-SMA)的表达水平。用RhoA/Rho激酶信号通路阻断剂Y-27632处理后，再用TGF-β1刺激，作为实验组，将未作处理的正常细胞作为空白对照组，Y-27632（10 μmol/L）组作为阴性对照组，只用TGF-β1( 10 ng/ml)刺激组作为阳性对照组，分别检测α-SMA的表达差异。使用ANOVA对蛋白表达量进行统计学分析，P ＜0.05为差异有统计学意义。结果 10 ng/ml TGF-β1按不同作用时间刺激人皮肤成纤维细胞后，α-SMA的表达量分别为：0h为1.0，3h为1.9+0.2、6h为2.1±0.1,24 h为3.1±0.1。24 h较其他3个时间点α-SMA表达量明显上升（n=4，P＜0.05）。不同浓度TGF-β1刺激人皮肤成纤维细胞后，α-SMA的表达量分别为：0 ng/ml为1.0，2 ng/ml为1.4±0.2，10 ng/ml为3.2±0.1，50 ng/ml为3.1±0.2。10 ng/ml表达量明显高于0 ng/ml和2 ng/ml(n =4，P ＜0.05)，较50 ng/ml差异无统计学意义(n=4，P＞0.05)。用Y-27632（10 μmol/L）处理后，再用TGF-β1刺激，细胞的表型转化明显受到抑制，实验组α-SMA的表达量(1.2±0.2)较阳性对照组(2.9±0.1)明显降低(n=5，P ＜0.05)，与空白对照组(1.0)和阴性对照组(1.1±0.1)相比差异均无统计学意义(n=5，P＞0.05)。结论 RhoA/Rho激酶信号通路参与了 TGF-β1诱导的人皮肤成纤维细胞表型转化过程。