大鼠附睾脂肪垫脂肪源性干细胞的分离培养及分化潜能

背景：相对于骨髓基质干细胞，脂肪源性干细胞来源丰富，取材方便，干细胞丰度高，极易培养，具有多向分化潜能，有望成为组织工程、细胞治疗以及基因转染良好的源细胞，但目前对脂肪源性干细胞的研究尚处于初级阶段。目的：拟在体外分离培养大鼠脂肪源性干细胞，并探讨其分化潜能。设计、时间及地点：细胞学体外观察，于2008-06/2009-01在南方医科大学组胚教研室和南方医院临床医学实验中心完成。材料：SPF级成年雄性SD大鼠1只，由南方医科大学实验动物中心提供。方法：无菌条件下切取大鼠双侧附睾尾脂肪垫，胶原酶消化法分离培养脂肪源性干细胞，胰蛋白酶消化法传代扩增。取第4代脂肪源性干细胞接种到96孔板，5×104个细胞/皿，待细胞贴壁后分成3组：成骨诱导组加入成骨培养基，成脂诱导组加入成脂培养基，对照组仍用基础培养基，培养14 d。主要观察指标：脂肪源性干细胞的形态变化、体外增殖能力、细胞免疫化学鉴定结果。脂肪源性干细胞成骨和成脂分化能力。结果：体外培养的脂肪源性干细胞易扩增，传代后以长梭形细胞为主，呈旋涡状排列，克隆样生长；经多次传代仍能保持较强的增殖能力，细胞生长曲线呈“S”形；细胞表面标志CD44和CD49d呈阳性表达，CD106呈阴性表达。脂肪源性干细胞经成骨诱导7 d后，碱性磷酸酶染色呈阳性；成脂诱导3 d后，油红O染色示胞浆内有脂滴出现；对照组细胞碱性磷酸酶染色呈阴性，无脂滴存在。结论：从大鼠附睾脂肪垫内分离的脂肪源性干细胞易于培养和传代扩增，在特殊条件下可分化为成骨细胞和脂肪细胞。

Isolation, culture and differentiational potential of adipose-derived stem cells from rat epididymal fat pads