潜伏活性的可溶性肿瘤坏死因子受体Ⅰ靶向治疗子宫内膜异位症的实验研究

目的 构建LAP-MMP-hsTNFR Ⅰ-pcDNA3.1融合蛋白真核表达载体,检测融合蛋白的潜伏活性. 方法 将编码MMP分解部位的DNA序列经基因重组定向克隆至真核表达载体pcDNA3.1中,并将TGF-β1的LAP段和人可溶性肿瘤坏死因子受体(hsTNFR)1分别与MMP分解部位的N端和C端连接,构建LAP-MMP-hsTNFR Ⅰ-pcDNA3.1真核表达载体.经测序鉴定后转染COS-7细胞,通过RT-PCR及免疫印迹检测融合蛋白LAP-MMP-hsTNFR Ⅰ的表达.在融合蛋白被MMP或子宫内膜异位症患者腹腔液孵育的前后,用MTT法检测其对TNF-α细胞毒效应的抑制活性. 结果 成功构建了LAP-MMP-hsTNFR Ⅰ-pcDNA3-1重组载体,并在COS-7细胞得到了有效表达.生物学活性检测表明重组质粒LAP-MMP-hsTNFR Ⅰ转染组与空载体转染组的L929细胞死亡率差异无统计学意义(P>0.05).但在800 ng/L肿瘤坏死因子(TNF)-α作用下,重组质粒转染上清与MMP和子宫内膜异位症患者的腹腔液孵育后,L929细胞死亡率分别为(44.5±2.4)%和(33.8±1.9)%,显著低于孵育前(58.1±2.4)%,(P<0.05). 结论 LAP-MMP-hsTNFR Ⅰ重组融合蛋白的生物学活性可被LAP有效潜伏,并可被MMP和子宫内膜异位症患者的腹腔液激活,可应用于子宫内膜异位症的局部靶向治疗.