乙型肝炎病毒DNA聚合酶TP257抗α-干扰素机制初步探讨

目的筛选与乙型肝炎病毒DNA聚合酶N端257个氨基酸（TP257）相结合的抗α-干扰素（IFN-α）相关性肝细胞蛋白，初步探讨TP257抗IFN—α作用机制。方法构建TP257腺病毒穿梭载体pShuttle-IRES-hrGFP-TP257，并与腺病毒骨架载体pADEasy-1重组，以293A细胞包装重组腺病毒。用重组腺病毒感染Huh7细胞并以IFN-α诱导，收获细胞蛋白，Western blot验证TP257蛋白在细胞中的表达。细胞蛋白进行免疫沉淀，SDS-PAGE分离后通过质谱鉴定差异蛋白。结果构建的重组腺病毒AD-TP257能有效感染Huh7细胞并大量表达TP257蛋白。Huh7细胞感染ADTP257后以IFN-α处理，并通过免疫沉淀筛选到4种差异蛋白，其中3种经肽质量指纹图谱鉴定分别为热休克蛋白60、组蛋白HIST1H2BC和肌凝蛋白调节轻链12A。结论TP257抗IFN—α效应可能与它和特定肝细胞蛋白结合并相互作用有关。