| 肺炎链球菌溶血素的体外表达及活性鉴定 |
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| 引用本文： | 贺潇,袁军,王虹,李忱炜,姜慧,董杰,崔瑾,董姗姗,周爱娥,张雪梅,胥文春,尹一兵,何於娟. 肺炎链球菌溶血素的体外表达及活性鉴定[J]. 第三军医大学学报, 2011, 33(3) |
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| 作者姓名： | 贺潇 袁军 王虹 李忱炜 姜慧 董杰 崔瑾 董姗姗 周爱娥 张雪梅 胥文春 尹一兵 何於娟 |
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| 作者单位： | 重庆医科大学检验系临床检验诊断学教育部重点实验室,重庆,400016 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金面上项目 |
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| 摘 要： | 目的 体外扩增肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pn)的溶血素(pneumolysin,ply)基因,在大肠杆菌中高效表达,并验证其生物活性.方法 分离培养D39型肺炎链球菌并提取其基因组DNA,采用PCR技术体外扩增ply基因,体外重组将ply序列克隆到原核表达载体pET28(a)内,测序鉴定后将重组子转化到E.coli Rosetta(DE3)中,经IPTG诱导大量表达融合6个组氨酸标签的Ply重组蛋白,经Ni-NTA树脂纯化后,获得的重组蛋白经SDS-PAGE鉴定后检测其溶血活性和细胞毒性.结果 克隆的ply序列与GenBank中的数据相符,并实现了Ply蛋白的可溶表达.所获重组蛋白纯度达到95%.溶血实验显示 Ply对人红细胞具有极高的溶血活性,与对照组相比较差异有统计学意义(P＜0.05),并呈剂量依赖.细胞毒实验显示Ply对脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)细胞具有明显抑制作用,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),并呈剂量与时间依赖性,IC50(24h)为1.525 μg/ml.结论 经测序鉴定ply基因正确扩增,并成功表达、纯化出具有高溶血活性和细胞毒性的Ply蛋白.
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| 关 键 词： | 肺炎链球菌 溶血素 原核表达 生物活性 |
In vitro expression of pneumolysin and identification of its biological activity |
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| He Xiao,Yuan Jun,Wang Hong,Li Chenwei,Jiang Hui,Dong Jie,Cui Jin,Dong Shanshan,Zhou Ai'e,Zhang Xuemei,Xu Wenchun,Yin Yibing,He Yujuan. In vitro expression of pneumolysin and identification of its biological activity[J]. Acta Academiae Medicinae Militaris Tertiae, 2011, 33(3) |
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| Authors: | He Xiao Yuan Jun Wang Hong Li Chenwei Jiang Hui Dong Jie Cui Jin Dong Shanshan Zhou Ai'e Zhang Xuemei Xu Wenchun Yin Yibing He Yujuan |
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