miR-98-5p通过靶向调控TRAF6表达促进肺泡巨噬细胞M2表型分化以保护脓毒症引起的急性肺损伤

目的在脓毒症急性肺损伤中探讨miR-98-5p对肺泡巨噬细胞表型分化的影响并初步探究其相关分子机制。方法利用盲肠结扎穿孔(cecal ligation and puncture,CLP)术建立大鼠急性肺损伤(ALI)模型,并将40只SD大鼠分为4组(n=10):假手术(Sham)组,脓毒症组(以下简称CLP),CLP~+agomir NC组(CLP~+agomir NC),CLP~+miR-98-5p agomir组(CLP~+miR-98-5p agomir)。在CLP术后24 h处死各组大鼠并收集肺泡灌洗液(BALF)及双肺组织,利用HE染色、ELISA及检测肺组织干湿比重(W/T)来探究在大鼠体内过表达miR-98-5p对脓毒症介导的ALI的肺组织结构、肺泡灌洗液(BALF)中炎性因子的表达及肺部含水量的影响;分离大鼠原代肺泡巨噬细胞(AMs),细胞流式检测过表达miR-98-5p对ALI大鼠AMs的M1、M2表型分化影响;免疫磁珠分选F4/80~+AMs,利用RT-PCR检测M1、M2表型特征分子标记基因iNOS、CD206、Arg1的表达水平;生物信息学筛选TRAF6作为miR-98-5p的潜在靶基因,利用双荧光素酶基因报告实验进行检测;利用RT-PCR检测过表达miR-98-5p后的ALI大鼠AMs中miR-98-5p与TRAF6 mRNA的表达;应用细胞免疫化学法与Western blot实验在F4/80~+AMs中检测TRAF6与TLR4/MyD88/NF-κB信号通路中TLR4、MyD88、p65、p-p65蛋白的表达。结果 HE染色、ELISA及肺组织干湿比重(W/T)的检测结果表明,在脓毒症大鼠ALI模型中,过表达miR-98-5p可明显缓解ALI大鼠肺部病理学改变,降低BALF中促炎因子IL-6、IL-1β、TNF-α的分泌水平,增加抗炎因子IL-10的分泌,并减少ALI肺部含水量;细胞流式结果显示过表达miR-98-5p可诱导ALI大鼠AMs向M2表型分化,抑制其向M1表型分化;在F4/80~+AMs中,RT-PCR实验结果显示,过表达miR-98-5p可抑制M1表型特征分子iNOS mRNA表达水平,而促进M2型特征分子CD206、Arg1表达水平;双荧光素酶基因报告实验结果显示,在大鼠AMs中miR-98-5p可靶向调控ARTF6 mRNA的表达。细胞免疫化学法与Western blot实验结果显示,过表达miR-98-5p明显抑制ALI大鼠的F4/80~+AMs中TRAF6及TLR4、MyD88、p-p65蛋白表达表达。结论 miR-98-5p可通过TLR4/MyD88/NF-κB信号通路负向调控TRAF6的表达来诱导脓毒症急性肺损伤大鼠的肺泡巨噬细胞向M2型分化,从而减轻肺部的炎症反应并保护肺泡组织的正常结构及功能。