山姜素通过促进IL-6启动子CpG岛区域胞嘧啶甲基化并抑制表达 |
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作者姓名: | 胡柯 黄民江 阎青 李玉娴 陈月富 陈立军 张英俊 谭碧峰 尹辉明 |
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作者单位: | 418000怀化,湖南医药学院医学院;418000怀化,湖南医药学院护理学院;418000怀化,湖南医药学院第一附属医院心血管科;418000怀化,湖南医药学院第一附属医院呼吸科 |
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基金项目: | 湖南省自然科学基金;湖南省教育厅科学研究项目 |
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摘 要: | 目的通过检测山姜素对鼠巨噬细胞(RAW246.7)IL-6启动子部位CpG岛二核苷酸甲基化修饰状态及IL-6合成的影响,揭示诱导甲基化修饰是山姜素调控炎症分子表达的重要机制。方法 RAW246.7按照不同干预分为对照组、山姜素组(终质量浓度分别为100、200、500μg/ml以及1 mg/ml)、山姜素+GW9662组以及山姜素+DNMT3A(DNA甲基转移酶3A)SiRNA组,孵育96 h后经亚硫酸氢钠处理。亚硫酸氢盐测序PCR分析IL-6启动子序列碱基信息,甲基化PCR分析以上序列中CpG二核苷酸甲基化修饰状态,Western blot法检测RAW246.7核内PPAR以及DNMT3A含量,ELISA法检测IL-6表达水平。结果经Cpgplot数据库确认鼠巨噬细胞IL-6转录起始点上游300~1 300 bp部位存在典型CpG岛,山姜素可呈剂量依赖性促进该岛内CpG二核苷酸甲基化修饰。山姜素可促进核内DNMT3A合成,GW9662可阻断促进作用,而干扰DNMT3A不影响PPAR表达;另外,GW9662以及DNMT3A干扰均可完全逆转山姜素对甲基化修饰的促进;但GW9662更明显恢...
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关 键 词: | 山姜素 IL-6 CpG岛 甲基化 |
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