辐射诱导乏氧HeLa细胞HIF-1α和DNA-PK相互调控机制的研究

目的初步探讨辐射效应诱导下乏氧人宫颈癌细胞系HeLa细胞乏氧诱导因子-1α（HIF-1α）和DNA依赖蛋白激酶（DNA—PK）表达相关性及其调控机制。方法免疫印迹法检测乏氧状态下HeLa细胞接受射线照射后HIF-1α和DNA—PK（包括DNA—PKcs及Ku80）表达情况；运用靶向抑制HIF-1α或DNA—PKcs的小发卡样干扰RNA（shRNA）表达质粒分别转染乏氧HeLa细胞，经辐射诱导后检测不同时间点各自DNA—PKcs或HIF-1α表达的变化。结果乏氧HeLa细胞经辐射诱导后0、12、24、48h时间点检测到HIF-1α、DNA-PKcs和Ku80表达随时间增加逐渐增高，其中HIF-1a和DNA—PKcs的相对表达量呈正相关（r=0．816，P=0．041）；运用HIF1a—shRNA表达质粒明显抑制乏氧HeLa细胞内HIF-1α表达，检测到细胞经照射后12、24、48h时间点DNA-PKcs的表达与转染空白质粒的阴性对照组相比差异均无统计学意义（P〉0．05）；而pDNAPKcs-shRNA表达质粒抑制DNA-PKcs表达后检测各时间点HIF-1α的表达与转染空白质粒的阴性对照组相比均明显减少（P〈0．05）。结论辐射诱导乏氧HeLa细胞内HIF-1α表达与DNA-PKcs的表达水平相关；通过抑制DNA-PKcs的表达能显著降低乏氧HeLa细胞HIF-1α表达水平，对HIF-1α的调控机制提出新的思路。