血小板衍生生长因子-BB通过转化生长因子-β信号系统调节大鼠血管平滑肌细胞内p21~(WAF1)表达

目的 探讨血小板衍生生长因子(PDGF)-BB是否通过诱导转化生长因子(TGF)-β_1,表达及其信号系统调节p21~(WAF1)表达.方法 采取8～9周龄雄性Sprague-Dawley大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)进行体外培养,分为对照组、中和性抗TGF-β_1抗体组(20μg/ml,抗体组)、PDGF-BB组(40 ng/ml)、PDGF-BB+中和性抗TGF-β_1抗体组(PDGF-BB+抗体组),实验时间为48 h.逆转录酶-聚合酶链式反应检测TGF-β_1mRNA的表达,ELISA方法检测TGF-β_1蛋白的表达.Western blot检测p21~(WAF1)及TGF-β信号系统下游蛋白表达,后者包括TGF-β_1I类受体(在VSMC内表现为ALK-5)、Smurf2、pSmad2/3、Smad4、Smad7.结果 PDGF-BB组的TGF-β_1 mRNA(24 h)和TGF-β_1(48 h)蛋白分子表达水平分别为(447.716±23.911)和(0.309±0.034)ng/ml,明显高于对照组(250.435±17.869)和(0.104±0.013)ng/ml(P均＜0.01).p21WAF1蛋白表达在对照组0.621±0.046和抗体组0.657±0.058之间差异无统计学意义,PDGF-BB组表达仅为0.204±0.033,与对照组和抗体组比较差异均有统计学意义(P均＜0.01),PDGF-BB+抗体组表达为0.530±0.043,与对照组和抗体组相比差异均有统计学意义(P均＜0.05),与PDGF-BB组比较差异亦有统计学意义(P＜0.01).PDGF-BB组ALK-5 0.634±0.060、pSmad2/31.894±0.184、Smad4 1.129±0.136及Smurf2 0.559±0.047的表达水平分别高于对照组和抗体组0.288±0.049和0.300±0.047、0.972±0.096和0.887±0.059、0.665±0.055和0.709±0.058、0.158±0.040和0.224±0.064(P均＜0.01),对照组与抗体组之间差异无统计学意义,以上蛋白PDGF-BB+抗体组的表达分别比PDGF-BB组低了(85±9.5)%、(79±12)%、(91±17)%和(84±5)%.Smad7蛋白表达在对照组0.461±0.035与抗体组0.458±0.031之间差异无统计学意义,PDGF-BB组0.160±0.028与对照组和抗体组比较差异均有统计学意义(P均＜0.01),PDGF-BB+抗体组0.375±0.039与PDGF-BB组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 PDGF-BB调节p21~(WAF1)的表达部分通过TGF-β_1及其信号系统.