双硫仑螯合铜对耐紫杉醇乳腺癌细胞增殖、迁移、凋亡及自噬的影响

目的探讨双硫仑螯合铜( DSF-Cu)对耐紫杉醇乳腺癌细胞增殖、迁移、凋亡及自噬的影响。方法 2018年 1月至 2019年 10月，培养 MCF-7人乳腺癌细胞和耐紫杉醇乳腺癌 MCF-7/紫杉醇细胞，用定量紫杉醇持续诱导 MCF-7/紫杉醇细胞维持耐药性。通过 CCK-8法检测 MCF-7/紫杉醇细胞耐药指数；通过 CCK-8法检测 MCF-7/紫杉醇细胞在不同浓度 DSF-Cu(5、10、 15、20、25 μmol/L)干预不同时间( 24 h和 48 h)后的抑制率，并分析细胞抑制率与 DSF-Cu浓度和作用时间的关系；通过划痕实验检测 DSF-Cu对 MCF-7/紫杉醇细胞迁移能力的影响；通过实时荧光定量逆转录聚合酶链反应( qRT-PCR)和蛋白质印迹法检测 MCF-7和 MCF-7/紫杉醇细胞中 B细胞淋巴瘤 -2(Bcl-2)、 Bcl-2相关 X蛋白( Bax)和自噬效应蛋白 Beclin-1基因和蛋白的表达，并在紫杉醇和 DSF-Cu单药及联合干预 MCF-7/紫杉醇细胞中后，检测 Bcl-2、Bax和 Beclin-1蛋白的表达；通过流式细胞计数技术检测不同浓度 DSF-Cu(5、10、15、20 μmol/L)干预 MCF-7/紫杉醇细胞不同时间( 12 h、24 h和 48 h)后细胞凋亡情况。结果 MCF-7和 MCF-7/紫杉醇细胞在紫杉醇干预 24 h后 IC50值分别为 1 394.79 μmol/L和 321.42 μmol/L，MCF-7/紫杉醇细胞耐药指数为 4.34；在不同浓度 DSF-Cu(5、10、15、20、25 μmol/L)DSF-Cu干预 MCF-7/紫杉醇细胞 24 h后细胞抑制率分别为( 27.42±3.38)%、(42.71±0.77)%、(57.52±7.10)%、(73.83±1.76)%、(85.55±2.25)%，48 h后细胞抑制率分别为( 51.27±4.59)%、(57.34±5.94)%、(71.50±1.80)%、(81.54±4.36)%、(90.96±2.13)%，DSF-Cu以浓度与时间依赖性抑制乳腺癌 MCF-7/紫杉醇细胞增殖( P<0.05)；划痕实验证实 DSF-Cu能抑制乳腺癌 MCF-7/紫杉醇细胞迁移； qRT-PCR结果显示，与 MCF-7细胞相比， MCF-7/紫杉醇细胞中 Bcl-2和 Beclin-1基因表达升高， Bax基因表达降低( P<0.05)；蛋白质印迹法结果显示，与 MCF-7细胞比较， MCF-7/紫杉醇细胞中 Bcl-2和 Beclin-1蛋白表达升高， Bax蛋白表达降低( P<0.05)。 MCF-7/紫杉醇细胞在紫杉醇和 DSF-Cu单药及联合干预后 Bcl-2表达分别为 1.81±0.28、1.25±0.09、0.87±0.10，Bax表达分别为 0.65±0.15、1.07±0.15、1.34±0.04，Beclin-1表达分别为 1.53±0.22、0.85±0.18、0.53±0.08，MCF-7/紫杉醇细胞在 DSF-Cu干预后 Bax蛋白表达升高， Bcl-2和 Beclin-1蛋白表达降低( P<0.05)；式结果显示不同浓度 DSF-Cu(0、5、10、15、20 μmol/L)干预 MCF-7/紫杉醇细胞 24 h后，细胞凋亡率分别为( 5.50±1.01)%、流(11.03±1.04)%、(55.12±5.06)%、(68.86±3.36)%、(80.07±4.30)%，在 IC50浓度的 DSF-Cu干预 MCF-7/紫杉醇细胞不同时间( 0h、 12 h、24 h、48 h)后，细胞凋亡率分别为( 4.47±0.57)%、(15.92±2.63)%、(34.85±2.70)%、(74.94±1.13)%，MCF-7/紫杉醇在 DSF-Cu干预后细胞凋亡情况与 DSF-Cu呈浓度和时间依赖性( P<0.05)。结论 DSF-Cu可通过诱导凋亡、抑制自噬来抑制乳腺癌 MCF-7/紫杉醇细胞增殖和迁移，逆转乳腺癌 MCF-7细胞对紫杉醇耐药性。

Effect of DSF-Cu on the proliferation, migration, apoptosis and autophagy of paclitaxel-resistant breast cancer cells