粗糠柴毒素上调微小 RNA-204-5p对脂多糖所致心肌损伤的保护机制研究

目的探讨粗糠柴毒素对脂多糖( LPS)所致心肌损伤的影响及其保护机制。方法该研究自 2018年 9月至 2019年 4月，用终浓度为 10 mg/L的 LPS刺激 HCM、AC16心肌细胞 6h，分别加入终浓度为 0.5 μmol/L、1.0 μmol/L、1.5 μmol/L、2.0 μmol/L粗糠柴毒素( Rottlerin)再处理 12 h后分别记为 LPS+0.5 μmol/L Rottlerin组、 LPS+1.0 μmol/L Rottlerin组、 LPS+1.5 μmol/L Rottler. in组、 LPS+2.0 μmol/L Rottlerin组，以单纯 10 mg/L LPS处理的为 LPS组，以未经粗糠柴毒素和 LPS处理的为对照组。将模拟物阴性对照( miR-NC)、微小 RNA-204-5p模拟物( miR-204-5p)、抑制剂阴性对照( anti-miR-NC)、 miR-204-5p抑制剂( anti-miR-204-5p)分别转染至未经任何处理的 HCM细胞中，记为 miR-NC组、 miR-204-5p组、 anti-miR-NC组、 anti-miR-204-5p组。将 miR-NC， miR-204-5p转染至单纯 10 mg/L LPS处理的 HCM细胞中，记为 LPS+miR-NC组， LPS+miR-204-5p组。将 anti-miR-NC、anti-miR-204-5p、过表达空载体( pcDNA3.1)、高迁移率族蛋白 B1(HMGB1)过表达载体( pcDNA3.1-HMGB1)转染至 2.0 μmol/L粗糠柴毒素和 10 mg/L LPS处理 HCM细胞中，记为 LPS+Rottlerin+anti-miR-NC组、 LPS+Rottlerin+anti-miR-204-5p组、 LPS+Rottlerin+pcD. NA3.1组、 LPS+Rottlerin+pcDNA3.1-HMGB1组。 MTT法检测各组细胞增殖；流式细胞术检测细胞凋亡；实时荧光定量逆转录聚合酶链反应( qRT-PCR)检测 miR-204-5p和 HMGB1 mRNA的表达水平；蛋白质印迹法检测蛋白表达；双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。结果与对照组相比， LPS组心肌细胞 HCM、AC16抑制率显著升高， HCM细胞中 miR-204-5p(0.30±0.03比 1.99±0.08)和 B淋巴细胞瘤 -2(Bcl-2)表达显著下降， Bax、HMGB1(1.04±0.10比 0.26±0.02)表达和凋亡率［( 27.79±2.23)%比(5.61±0.05)%］显著升高；相较于 LPS组， LPS+0.5、1.0、1.5、2.0 μmol/L Rottlerin组 HCM、AC16细胞抑制率显著降低， HCM细胞中 miR-204-5p(0.46±0.04、0.54±0.05、0.76±0.04、0.88±0.07比 0.30±0.03)和 Bcl-2表达显著升高， Bax、HMGB1(0.93±0.09、0.80±0.08、0.62±0.06、0.53±0.05比 1.04±0.10)表达和凋亡率［( 22.61±2.14)%、(20.06±1.94)%、(11.71±1.01)%、(9.16±1.00)%比(27.79±2.23)%］显著降低，呈浓度依赖型。与 LPS+miR-NC组相比， LPS+miR-204-5p组 HCM细胞中 miR-204-5p(0.86±0.07比 0.42±0.03)和 Bcl-2表达升高， Bax表达及细胞抑制率和凋亡率［( 15.76±1.32)%比( 27.26±2.25)%］降低。 miR-204-5p可靶向调控 HMGB1；抑制 miR-204-5p表达、过表达 HMGB1均能逆转 Rottlerin对 LPS作用的心肌细胞 HCM的保护作用。结论粗糠柴毒素对 LPS所致的心肌细胞损伤有保护作用，其机制主要是通过上调 miR-204-5p表达，进而抑制 HMGB1的表达发挥作用。

Study on the protective mechanism of rottlerin up-regulates miR-204-5p on cardiomyocytes damage induced by LPS