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a-N-乙酰半乳糖胺酶多克隆抗体的制备及特异性鉴定
引用本文:李素波,高红伟,张雪,鲍国强,王颖丽,徐丽娟,季守平,宫锋.a-N-乙酰半乳糖胺酶多克隆抗体的制备及特异性鉴定[J].中国输血杂志,2012,25(7):652-654.
作者姓名:李素波  高红伟  张雪  鲍国强  王颖丽  徐丽娟  季守平  宫锋
作者单位:1. 军事医学科学院野战输血研究所,北京,100850
2. 军事医学科学院附属医院输血科,北京,100071
摘    要:目的制备a-N-乙酰半乳糖胺酶(NAGA)的高效价高特异性的兔多克隆抗体。方法利用pET22b-NA-GA/BL21(DE3)工程菌株表达NAGA,经Ni2+Sepharose 6 FF亲合层析,Phenyl Sepharose 6 FF疏水层析两步纯化,得到纯度95%的NAGA作为抗原免疫新西兰白兔,获得NAGA的兔抗血清,并经HiTrap rProtein A柱纯化获得高效价高特异性的抗体;用间接ELISA法检测抗体效价,用Western blotting评价抗体特异性。结果制备得到的NAGA兔多克隆抗体血清效价为1×106,经过rProtein A柱纯化后抗体蛋白纯度95%,效价为1×105;Western blotting显示:该NAGA兔多克隆抗体只与NAGA发生特异性反应。结论获得了NAGA的高效价高特异性的兔多克隆抗体。

关 键 词:a-N-乙酰半乳糖胺酶  蛋白纯化  兔多克隆抗体  特异性
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