a-N-乙酰半乳糖胺酶多克隆抗体的制备及特异性鉴定 |
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引用本文: | 李素波,高红伟,张雪,鲍国强,王颖丽,徐丽娟,季守平,宫锋.a-N-乙酰半乳糖胺酶多克隆抗体的制备及特异性鉴定[J].中国输血杂志,2012,25(7):652-654. |
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作者姓名: | 李素波 高红伟 张雪 鲍国强 王颖丽 徐丽娟 季守平 宫锋 |
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作者单位: | 1. 军事医学科学院野战输血研究所,北京,100850 2. 军事医学科学院附属医院输血科,北京,100071 |
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摘 要: | 目的制备a-N-乙酰半乳糖胺酶(NAGA)的高效价高特异性的兔多克隆抗体。方法利用pET22b-NA-GA/BL21(DE3)工程菌株表达NAGA,经Ni2+Sepharose 6 FF亲合层析,Phenyl Sepharose 6 FF疏水层析两步纯化,得到纯度95%的NAGA作为抗原免疫新西兰白兔,获得NAGA的兔抗血清,并经HiTrap rProtein A柱纯化获得高效价高特异性的抗体;用间接ELISA法检测抗体效价,用Western blotting评价抗体特异性。结果制备得到的NAGA兔多克隆抗体血清效价为1×106,经过rProtein A柱纯化后抗体蛋白纯度95%,效价为1×105;Western blotting显示:该NAGA兔多克隆抗体只与NAGA发生特异性反应。结论获得了NAGA的高效价高特异性的兔多克隆抗体。
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关 键 词: | a-N-乙酰半乳糖胺酶 蛋白纯化 兔多克隆抗体 特异性 |
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