反义蛋白激酶Cγ寡核苷酸对原代培养大鼠脑神经元蛋白激酶Cγ mRNA表达与皮质和海马神经元增殖及神经突起生长的影响

目的:观察阳离子脂质体Lipofectamine介导的蛋白激酶CγAsODN对原代培养大鼠脑神经元蛋白激酶CγmRNA表达及生长的影响。方法:实验于2004-03/08在华中科技大学同济医学院附属同济医院完成。①实验分组:取新生50只SD乳鼠大脑皮质及海马神经元进行原代培养,分为正常对照组,空脂质体转染组,300nmol/L Lipofectamine-SODN转染组,100nmol/L Lipofectamine-AsODN转染组,300nmol/L Lipofectamine-AsODN转染组,每组10瓶。②实验方法:培养第4￣5天采用脂质体或脂质体包裹的不同浓度的AsODN或SODN蛋白激酶Cγ转染培养神经元。③实验评估:采用倒置显微镜对神经元的生长进行动态观察;免疫组化ABC法进行蛋白激酶Cγ阳性神经元的鉴定;MTT法检测神经元的增殖率;RT-PCR方法检测转染后神经元的蛋白激酶CγmRNA的表达变化。结果:①蛋白激酶Cγ阳性神经元呈胞浆内棕褐色染色,胞核不显色。②蛋白激酶CγAsODN转染早期呈现促进神经元突起生长,胞体分化的作用。随着反义浓度增加,相对生长指数值升高。而在转染晚期,ASODN蛋白激酶Cγ转染组凋亡率均明显增加。③AsODN蛋白激酶Cγ可降低神经元蛋白激酶CγmRNA的表达。结论:蛋白激酶CγAsODN可减少神经元蛋白激酶CγmRNA的表达,并刺激皮质及海马神经元的增殖及神经突起的生长,这可能与蛋白激酶Cγ对神经元的生长起负性调控作用有关。

Effect of protein kinase C gamma antisense oligodeoxynucleotides on the expression of protein kinase C gamma mRNA, proliferation of cortical and hippocampal neurons and growth of nervous process in primary cultured rats