钙调蛋白激酶在L型钙通道“run-down”现象发生及恢复过程中的作用

目的；研究钙调蛋白激酶（CaMKⅡ）在钙通道“run-down”现象发生及恢复过程中的作用机制。方法：用酶分离单个豚鼠心室肌细胞，利用膜片钳单通道技术，在细胞膜面内向外的模式下，诱发L型钙通道“run-down”现象。制备活性钙调蛋白激酶（CaMKⅡ αT286D），记录并分析它在L型钙通道“run—down”现象中的影响。结果：在细胞膜面内向外的钳制模式下1分钟后，细胞内液中加入CaMK ⅡαT286D（1-30μM），仅使钙通道活性恢复2-10％。但发现CaMKⅡ αT286D可消除CaM对钙通道“run-down”现象恢复作用的时间依存性。在CaMKⅡ αT286D和CaM共同存在条件下，记录到第5分钟的钙通道活性（158．1±62．2％）几乎等同于第1分钟的（148．4±55．5％）。制备CT-1，即含豚鼠Cav1．2通道蛋白C末端1509．1789氨基酸的一个GST融合蛋白。Pull-down实验结果显示，CT-1经CaMKⅡ αT286D处理后，CaM的亲和力高于未经磷酸化或去磷酸化处理的亲和力。结论：CaMKⅡ介导的L型钙通道磷酸化调节了CaM对钙通道的亲和力，延长了CaM对钙通道“run-down”现象恢复作用时间，是“run-down”现象的一个重要调节因子。