肿瘤坏死因子对内皮细胞组织因子表达及转录调控的影响

目的：研究肿瘤坏死因子（TNFα）对内皮细胞组织因子（TF）表达的影响，并探讨TF基因5′上游序列以及核转录因子NF－κB在该基因转录中的调控作用。方法：进行人脐静脉内皮细胞株（EVC304）及原代内皮细胞的培养。用发色底物显色法、RT－PCR和细胞原位杂交分别检测内皮细胞TF活性和mRNA水平，采用基因重组技术构建含有人TF基因不同上游序列荧光素酶报告基因质粒，经脂质体法转染内皮细胞，检测及分析报告基因活性。凝胶电泳迁移率改变法和western印迹法检测内皮细胞NF－κB与DNA结合活性和含量。结果：100u/ml TNFα诱导内皮细胞TF活性和mRNA表达量明显增高。在TF基因上游序列－244／＋121bp存在时，TNFα可使转染内皮细胞荧光素酶表达量明显增加，－111／＋121bp存在时表达量无明显差异，而且比存在－244／＋121bp时的表达量明显降低；同样浓度TNFα作用下，内皮细胞核抽提物与NF－κB探针的结合活性高于正常对照组，核内NF－κB含量明显增加。结论：TNFα可以增强内皮细胞TF活性及基因表达，其中TF基因上游－244／－112bp序列的存在起着重要的调节作用。此外，TNFα也能促进内皮细胞NF－κB的转位和与DNA结合活性增高。

Effect of Tumor Necrosis Factor a on Tissue Factor Expression and Regulatory in Human Vascular Endothelial Cells