反向点杂交快速诊断非缺失型α-地中海贫血 |
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作者姓名: | 李莉艳 莫秋华 徐湘民 |
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作者单位: | 510515,广州,第一军医大学医学遗传学研究室 |
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基金项目: | 国家重点基础研究发展规划"973"项目(2001CB510308);广东省科委和广东省卫生厅联合攻关重点项目(99B06704G) |
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摘 要: | 目的 建立一种简便快速筛查非缺失型α—地中海贫血点突变的反向点杂交(reverse dot blot,RDB)技术。方法 将生物素直接标记在引物上,选择性扩增人α2珠蛋白基因,将PCR产物与固化在膜条上的寡核苷酸探针杂交,洗膜、显色后分析结果。结果 采用生物素标记的引物:Bio—C1和Bio—C3可选择性扩增α2珠蛋白基因,PCR产物长度为1085bp,该标记片段与固相探针构成的反向点杂交检测体系,可以分辨出中国人群中已知的6种非缺失型α—地中海贫血点突变。结论 该反向点杂交检测体系无需巢式PCR扩增,一步选择性扩增的α2珠蛋白基因产物即可用于杂交;无需进行检测标记物(如生物素)反应,而将生物素直接标记在引物上;无需不同的洗膜条件,故较已报道的同类方法更为简单易行。RDB技术可用于快速诊断中国人非缺失型α—地中海贫血点突变。
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关 键 词: | 反向点杂交 非缺失型α-地中海贫血 诊断 基因诊断 |
修稿时间: | 2003-11-06 |
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