| 细胞膜上稳定表达融合蛋白CRT/vGPCR A549细胞株的建立 |
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| 引用本文： | 秦烨,韩钰,任玉珊,王艳林.细胞膜上稳定表达融合蛋白CRT/vGPCR A549细胞株的建立[J].第三军医大学学报,2010,32(15). |
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| 作者姓名： | 秦烨 韩钰 任玉珊 王艳林 |
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| 作者单位： | 1. 宜昌,三峡大学,分子生物学研究所,湖北,443002
2. 443002,湖北,宜昌,三峡大学,分子生物学研究所;443002,湖北,宜昌,三峡大学,医学院生化教研室 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，三峡大学研究生创新基金 |
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| 摘 要： | 目的 将人钙网蛋白(calreticulin,CRT)基因与病毒G蛋白偶联受体(virus G-protein couple receptor,vGPCR)基因进行基因重组,用此重组基因建立细胞膜上稳定高表达CRT/vGPCR融合蛋白的人肺癌A549细胞株.方法 从pSG5-vGPCR质粒中获得全长vGPCR基因片段并与CRT全长编码序列的3′端连接形成融合基因,然后将融合基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)中.用此质粒转染人A549肺癌细胞,通过G418筛选建立稳定转染的A549细胞株,用RT-PCR检测重组融合基因的表达,用细胞免疫荧光分析鉴定融合蛋白的表达及其在细胞膜上的定位.结果 成功获得重组融合质粒pcDNA3.1(+)-CRT/vGPCR,经DNA序列测定证实融合基因两阅读框(ORF)对接无误.将上述质粒转染A549细胞后,建立了稳定转染CRT/vGPCR的A549细胞株,融合基因在A549细胞中表达并定位到细胞膜上.结论 通过与CRT基因融合重组,具有膜定位能力的vGPCR能将CRT蛋白高效包被到肿瘤细胞膜上.
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| 关 键 词： | CRT基因 vGPCR基因 A549细胞株 |
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