| Wistar大鼠smad3 cDNA序列测定及其mRNA水平实时荧光定量PCR检测方法的建立 |
| |
| 引用本文： | 李平,熊仁平,刘苹,赵艳,朱敏,周元国. Wistar大鼠smad3 cDNA序列测定及其mRNA水平实时荧光定量PCR检测方法的建立[J]. 感染、炎症、修复, 2008, 9(2): 82-86 |
| |
| 作者姓名： | 李平 熊仁平 刘苹 赵艳 朱敏 周元国 |
| |
| 作者单位： | 第三军医大学大坪医院野战外科研究所分子生物学中心,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆,400042;第三军医大学大坪医院野战外科研究所分子生物学中心,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆,400042;第三军医大学大坪医院野战外科研究所分子生物学中心,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆,400042;第三军医大学大坪医院野战外科研究所分子生物学中心,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆,400042;第三军医大学大坪医院野战外科研究所分子生物学中心,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆,400042;第三军医大学大坪医院野战外科研究所分子生物学中心,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆,400042 |
| |
| 基金项目： | 国家自然科学基金，国家重点基础研究发展计划(973计划) |
| |
| 摘 要： | 目的：克隆和测定Wistar大鼠smad3基因部分序列，构建检测Wistar大鼠smad3基因表达的重组质粒标准品并建立实时荧光定量聚合酶链式反应（PCR）方法。方法：提取并培养Wistar大鼠皮肤成纤维细胞的总RNA，逆转录（RT）-PCR扩增，将扩增产物克隆到PMD-18T载体上，测序分析。用已测定序列的T载体作为标准品建立实时荧光定量PCR方法，并检测转化生长因子-β1（TGF-β1）刺激对培养Wistar大鼠皮肤成纤维细胞smad3 mRNA表达的影响。结果：测定Wistar大鼠smad3基因cDNA序列长415bp，其与人、家鼠、小鼠具有较高的同源性，已被GenBank收录（DQ409172）。建立的实时荧光定量PCR方法在10^3-10^7拷贝数/μl的标准品梯度稀释范围内相关系数为0.98946。25ng/ml TGF-β1刺激后Wistar大鼠皮肤成纤维细胞smad3基因表达升高为PBS刺激对照组的1.5倍。结论：获得Wistar大鼠smad3基因序列并成功建立了smad3实时荧光定量PCR的方法，为Smad3作用的分子机制研究提供了实验基础。
|
| 关 键 词： | smad3 基因克隆 序列分析 定量聚合酶链式反应 |
Cloning and sequence analysis of the partial smad 3 gene of Wistar rat and development of real-time fluorescence polymerase chain reaction based SYBR Green |
| |
| Li Ping,Xiong Renping,Liu Ping,et al.. Cloning and sequence analysis of the partial smad 3 gene of Wistar rat and development of real-time fluorescence polymerase chain reaction based SYBR Green[J]. Infection Inflammation Repair, 2008, 9(2): 82-86 |
| |
| Authors: | Li Ping Xiong Renping Liu Ping et al. |
| |
| Affiliation: | Li Ping,Xiong Renping,Liu Ping,et al. State Key Laboratory of Trauma,Burns and Combined Injury,Molecular Biologic Center,Research Institute of Surgery and Daping Hosptial,Third Military Medical University,Chongqing 400042,China |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | smad 3 Gene cloning Sequence analysis Real-time fluorescence polymerase chain reaction |
| 本文献已被 CNKI 维普 万方数据 等数据库收录！ |
|
