转化生长因子-β1对大鼠肌成纤维细胞增殖及胞内Smad蛋白磷酸化的影响

目的 探讨转化生长因子-β1（TGF-β1）对大鼠肌成纤维细胞（MFB）增殖及胞内Smad蛋白磷酸化的影响。方法 TGF-β1（0．33～81pmol／L）在不同作用时间（5～120min）的条件下诱导MFB细胞活化，采用免疫吸附和Westernblot方法观察TGF-β1对MFB细胞内pSmad2C、pSmad2L、pSmad3L及Smad2／3蛋白表达的影响；采用M1Tr方法观察TGF-β1对MFB细胞增殖的影响。结果 在0．33—9pmol／L浓度范围内，TGF-β1均呈浓度依赖性刺激MFB细胞内Smad2C、Smad2L、Smad3L磷酸化，以9pmol／L最明显，TGF-β1在27、81pmol／L浓度时，Smad2C、Smad2L、Smad3L磷酸化仍处于高水平状态，而各组Smad2／3蛋白表达无明显变化。在TGF-β1为9pmol／L浓度条件下，30—60min孵育时间对MFB细胞增殖无明显影响，但可呈时间依赖性刺激MFB细胞内Smad2C、Smad2L、Smad3L磷酸化，以30min最明显，TGF-β1在60、120min时间时，Smad2C、Smad2L、Smad3L磷酸化仍处于高水平状态，而各组Smad2／3蛋白表达量无明显变化。结论 TGF-β1诱导MFB细胞内Smads磷酸化先于刺激细胞增殖。