| 靶向人血管紧张素原小干扰RNA表达质粒的构建和鉴定 |
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| 引用本文： | 伍丽华,杨汝德. 靶向人血管紧张素原小干扰RNA表达质粒的构建和鉴定[J]. 中国组织工程研究与临床康复, 2010, 14(11). DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2010.11.013 |
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| 作者姓名： | 伍丽华 杨汝德 |
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| 作者单位： | 华南理工大学生物科学与工程学院,广东省广州市,510640 |
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| 摘 要： | 背景:RNA干扰技术通过将具有一定结构特点、长19～25 bp的双链小干扰RNA导入哺乳动物细胞,特异性降解与其序列具有同源性的mRNA分子,导致目的基因表达抑制.目的:拟构建针对人血管紧张素原mRNA的小干扰RNA表达载体,从而抑制肾素基因在脂肪细胞的表达.方法:从NCBI中查找人血管紧张素原基因全长mRNA序列(NM000029),利用GeneScript公司提供的在线小干扰RNA模板序列设计软件,自行设计靶向血管紧张素原的两条shRNA的DNA模板单链,合成靶向血管紧张素原基因转录可形成茎环结构的寡聚核苷酸,退火后与酶切后的psiRNAT-U6.1/Neo质粒连接,在TOP10菌株中扩增,并测序鉴定.结果与结论:将含有血管紧张素原-mRNA目标序列19 bp的双链DNA插入片段,连接到pRNAT-U6.1/Neo质粒形成重组质粒.EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切后,空载体得到351 bp小片段,而人重组质粒得到397 bp小片段,与预期相符.EcoRI和Kpv Ⅰ双酶切后,空载体得到1条345 bp小片段,而人重组载体没有得到小片段条带,与预期相符.测序结果表明psiRNAT-U6.1/Neo质粒已经插入人脂肪细胞的干扰合成片段,无碱基突变,成功构建了靶向血管紧张素原-小干扰RNA表达载体.
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| 关 键 词： | 血管紧张素系统 血管紧张素原 血管紧张素转换酶 小干扰RNA 构建 质粒 |
Construction and identification of small interfering RNA expression plasmid target to angiotensinogen |
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| Wu Li-hua,Yang Ru-de. Construction and identification of small interfering RNA expression plasmid target to angiotensinogen[J]. Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research, 2010, 14(11). DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2010.11.013 |
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| Authors: | Wu Li-hua Yang Ru-de |
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| Affiliation: | Wu Li-hua,Yang Ru-deCollege of Bioscience , Bioengineering,South China University of Technology,Guangzhou 510640,Guangdong Province,China |
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| Abstract: | BACKGROUND: In mammalian cells, introduction of double-stranded small interfering RNA (19-25 bp) can cleave and destroy the cognate RNA, which can result in suppression of gene expression. OBJECTIVE: To construct siRNA expression plasmid for interference angiotensinogen (AGT), thereby, to resist AGT expression in adipose cells. METHODS: The mRNA sequence of AGT gene was searched from NCBI (NM000029). Utilize of GenScript siRNA technology, AGT-siRNA oligonucletides were chemically synthesized and inserted in... |
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