| ILK基因RNAi慢病毒表达载体的构建与鉴定 |
| |
| 引用本文： | 赵晓珍,徐振晔,许玲,王中奇,龚亚斌,周立娟. ILK基因RNAi慢病毒表达载体的构建与鉴定[J]. 中华肿瘤防治杂志, 2012, 19(24): 1841-1844 |
| |
| 作者姓名： | 赵晓珍 徐振晔 许玲 王中奇 龚亚斌 周立娟 |
| |
| 作者单位： | 上海中医药大学龙华医院肿瘤科,上海,200032 |
| |
| 基金项目： | 国家自然科学基金(81072739);上海中医药大学杏林学者资助项目(2209.13.03) |
| |
| 摘 要： | 目的:进一步研究整合素连接激酶(ILK)的功能,构建ILK基因RNAi慢病毒载体,并对其在肺腺癌A549细胞株中干扰效率进行鉴定.方法:针对ILK基因RNAi有效靶序列,合成4对oligo DNA,退火形成双链DNA,与经AgeI和EcoRI酶切的质粒pGCSIL-GFP载体连接产生shILK-LV慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定,用shILKi-LV载体、pHelper 1.0载体和pHelper 2.0载体共转染包装细胞293 T细胞,包装产生慢病毒,以293 T细胞绿色荧光蛋白(GFP)的表达水平测定病毒滴度.获得重组慢病毒后感染人肺癌A549细胞,荧光显微镜观察GFP及Real-time PCR检测ILK在A549细胞中的表达.结果:PCR扩增出插入片段,测序证实成功构建了ILK-shRNA慢病毒载体shILKi-LV.包装并浓缩慢病毒,滴度分别为6×108、6×108、5×108和4×108 pfu/mL;将病毒感染A549细胞,荧光显微镜下观察80％细胞表达绿色荧光,Real-time PCR检测ILK mRNA表达明显下降,其中染shILKFKD-1的A549细胞中ILK2-△△Ct值为0.058,shILKi-KD-2、3和4的ILK2-△△Ct值分别为0.162、0.072和0.119,尤以ILKsiRNA-1抑制最明显.结论:成功构建shILKi-LV病毒载体并建立了A549-shILKi细胞模型,为ILK在肺癌信号转导通路中的研究提供了工作基础.
|
| 关 键 词： | 蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶 慢病毒感染 肺肿瘤 基因表达 |
Construction and identification of lentivirus vector of ILK-siRNA gene |
| |
| ZHAO Xiao-zhen,XU Zhen-ye,XU Ling,WANG Zhong-qi,GONG Ya-bin,ZHOU Li-juan. Construction and identification of lentivirus vector of ILK-siRNA gene[J]. Chinese Journal of Cancer Prevention and Treatment, 2012, 19(24): 1841-1844 |
| |
| Authors: | ZHAO Xiao-zhen XU Zhen-ye XU Ling WANG Zhong-qi GONG Ya-bin ZHOU Li-juan |
| |
| Affiliation: | Department of Oncology,Longhua Hospital,Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 200032,P.R.China |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | |
| 本文献已被 CNKI 万方数据 等数据库收录！ |
|
