自噬相关基因Atg12和LC3-Ⅱ在脑缺血再灌注大脑表达的实验研究

目的：探讨局灶性脑缺血再灌注损伤（cerebral ischemia reperfusion injury，CIR）时大脑皮质自噬相关蛋白-12（autophagy related protein-12，Atg12）和自噬微管相关蛋白轻链3抗体Ⅱ（autophagy microtubule-associated protein light chain 3 antibodyⅡ，LC3-Ⅱ）的激活规律，在此基础上探讨其对脑组织自噬的影响。方法：实验分为假手术组（sham组）和缺血再灌注组（CIR组），且CIR组下设CIR 0、6、12、24、48、72h共6个亚组。除sham组和CIR 24h组为每组20只外（其中10只用于模型鉴定），其余为每组10只。采用大脑中动脉栓塞术制备局灶性脑缺血再灌注模型，再灌注24 h后采用神经功能评分、2，3，5-三苯基氯化四氮唑（2，3，5-Triphenyltetrazolium chloride，TTC）染色、脑组织含水量来鉴定脑缺血模型是否成功。采用免疫组化和免疫印迹方法检测大脑皮质Atg12和LC3-Ⅱ的表达规律。结果：与sham组比较，CIR 24h组可见明显的神经功能缺损、脑梗死和明显的脑水肿。免疫组化结果显示，Atg12和LC3-Ⅱ在大鼠脑缺血再灌注6 h开始表达阳性率分别为（15.49±4.18）%、（18.54±3.62）%]，在24~48 h达高峰（33.63±3.26）%、（29.62±1.73）%]，72 h之后逐渐减弱（24.90±3.96）%、（20.36±3.51）%]。免疫印迹结果显示，Atg12和LC3-Ⅱ在大鼠脑缺血再灌注6 h开始表达表达量为（0.372 3±0.076 5）、（0.148 4±0.011 5）]，在24~48 h达高峰（0.741 7±0.071 8）、（0.451 3±0.019 0）]，72 h之后逐渐减弱（0.365 0±0.042 0）、（0.245 1±0.030 3）]。结论：脑缺血时Atg12和LC3-Ⅱ在调节脑缺血的脑组织自噬方式中具有重要的作用。