IGF-1R旁路活化在EML4-ALK阳性非小细胞肺癌Alectinib继发耐药中的作用

摘 要：［目的］ 探讨胰岛素样生长因子-1（IGF-1）是否以旁路激活的方式诱导EML4-ALK融合基因阳性肺癌细胞株H3122对Alectinib的耐药，并进一步探讨旁路信号激活在 Alectinib耐药中的作用。［方法］ 通过外源性加入人胰岛素样生长因子1（hIGF-1）刺激H3122细胞株构建Alectinib耐药细胞株H3122-IGF-CR；通过CCK8法检测H3122细胞株及H3122-IGF-CR对不同浓度Alectinib的敏感性，并计算半数抑制浓度IC50和耐药指数；PE Annexin V/7-AAD双染法检测细胞凋亡情况；qRT-PCR检测亲本细胞中IGF-1R的表达情况；蛋白质印记法检测PI3K/AKT, Ras-Raf-MEK-ERK/MAPK信号通路的变化情况。［结果］ qRT-PCR结果显示IGF-1R在H3122细胞中ct值为20.90±0.06，内参ct值为12.48±0.12，ΔCt值＜12， 提示IGF-1R在H3122细胞株中高表达。H3122细胞的活力能被Alectinib抑制，且呈剂量依赖性，其IC50值为0.0173μmol/L；当加入50ng/ml或100ng/ml的hIGF-1刺激后，其对Alectinib敏感性降低，IC50为0.358μmol/L和0.4001μmol/L，耐药倍数为20.6倍和23.0倍。0.03μmol/L Alectinib单药处理48h后H3122细胞的凋亡率为（26.43±0.23）%，而Alectinib联合50、100、150ng/ml hIGF-1刺激48h后，凋亡率分别为（18.95±0.48）%、（15.90±0.16）%、（13.70±0.36）%，显著性低于Alectinib单药组（P<0.05）。外源性hIGF-1与IGF-1R结合后，明显增加细胞中p-IGF-1R及其下游p-AKT、p-mTOR、p-P70S6K、p-ERK的蛋白表达水平（P<0.05）。此外，联合应用IGF-1R抑制剂Linsitinib (OSI-906)可以抑制因hIGF-1配体导致的H3122耐药细胞的活力。［结论］ hIGF-1可通过旁路激活的方式诱导EML4-ALK阳性非小细胞肺癌H3122细胞对Alectinib耐药，其机制可能为激活了其下游信号通路PI3K/AKT,MAPK/ERK，初步证实 IGF-1R信号通路与Alectinib继发耐药相关。

IGF-1R Signaling Pathway Activation in Acquired Resistance of EML4-ALK Positive Lung Cancer Cell Line H3122 to Alectinib